细胞培养芯片-BE-DOUBEFLOW
概述
BE-DOUBLEFLOW是一种用于仿生条件下细胞培养的多功 能微流控芯片。它允许2D-3D组织培养与建立流动和气液界面 (ALI)的可能性相结合。仿生学微型芯片在体外复制不同的组织 结构。
典型应用实例有体外免疫系统模型，血管粥样硬化斑块形 成和上皮粘附等。
材质
BE-DOUBLEFLOW芯片由生物相容性材料制成，且气体不 渗透，可以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光学性能， 具有高透明度和低自荧光。
技术特点
BE-DOUBLEFLOW芯片是由多孔膜连接的两个通道组成。 带有螺旋状的进口和出口储液池，用于连接接头和毛细管路。 防蒸发储液池位于培养液储液池旁边，培养期间，毛细管封闭 系统之前，将PBS或水灌满防蒸发储液池以防止蒸发。
产品经过消毒(每盒10片)。常温(15-25℃)下，避免阳光直射，干燥处 存放。 细胞培养涂层 BE-DOUBLEFLOW芯片经过处理，表面亲水，便于用水溶液和/或凝 胶填充，以促进细胞粘附。 如果需要特定包被涂层，根据厂家说明准备涂层溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并应用到每个通道。 吸出涂层溶液，使用通道体积5-10倍的蒸馏水或PBS洗涤，去除多余的涂 层溶液。
填充和处理
1. 对细胞进行裂解和计数。细胞浓度随细胞类型而变化。 建议在2-3天内接种细胞以获得融合层。
2. 接种细胞。支持单分子层、水凝胶或两者同时接种。 2A. 在膜上方的通道中接种细胞。 2B. 在膜下方接种单层细胞。将下层通道填满细胞，并将其翻转， 促进细胞附着。如果进行此实验，首先在底层通道中接种细胞， 当细胞成功附着后，翻转芯片并继续按照协议在上面的通道中接 种细胞。 用P-100或P-1000移液管取100 μL带细胞的培养液，加到进样口。 培养液通过通道流到出口。注意将进口(1)填满，将出口(2)空出， 压力差将平衡进口和出口之间的培养液。在防蒸发储液池中加水 或PBS以避免蒸发。
3. 细胞粘附于表面(时间因细胞类型而异)。
4. 如果不连接流体控制系统，请在培养液储液池中添加所需的培养 液。为此，在进口旁边的培养液储液池中小心地添加培养液，压 力差将平衡进口和出口之间的培养液。
5. 如果连接流体控制系统，将接头分别接在出口和进口(按此顺序)。 入口和出口设计为标准连接(UNF 1/4”- 28)。请记住，在连接设备 和毛细管之前，必须先将储液池填充。
也可以用摇床把介质从一个储液池移到另一个储液池。当每个储液池 的最终体积为100 μl时，施加45°倾角。
流体控制系统的配置
Beonchip对流体控制系统的配置提出了一些建议。 前处理: 1. 在培养箱中预热毛细管和流体控制元件15-20分钟。 2. 将系统放置在超净台中。 3. 在安装流体控制系统之前，细胞必须良好地粘附在表面。 4. 芯片内部或入口/出口需要填充满培养液。
组装流体控制系统，需考虑以下事项:
1. 将入口填满培养液，防止有气泡残留。
2. 在组装系统之前，先将连接到入口的毛细管准备好。
3. 入口和出口都连接标准接头(UNF 1/4”- 28)。当系统准备好，将接 头连接在进口。过程中必须非常小心，以确保没有气泡进入系统。
4. 将毛细管连接到出口，封闭系统。
5. 检查系统是否有泄漏。在将系统放入生物反应柜或培养箱之前， 让泵运行几分钟。
注意：为防止过程中产生气泡，请避免将移液管倒空。当从吸液口移开 移液管时，紧紧握住柱塞，以免负压将溶液吸走。
细胞接种
下面是应用实例，以便更好地理解该芯片。 芯片可以进行单培养或共培养。在膜上和/或下接种不同类型的细胞 单分子层(1)。为了更实际的分析，可以在膜上添加水凝胶细胞培养物(3)。
细胞显微观察的准备
可监测固定的或活的细胞和化学梯度。传统细胞培养中使用的大多数 监测系统都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。细胞活力可以用不同的染料来评估。此外，免疫荧光染色可识别特异性靶点。 细胞周期荧光记录仪也可以使用。
其他读数
可以复苏细胞，以便进行下游应用，如流式细胞，RNA提取(PCR)… 欲了解更多信息，请联系BEC
