产品属性：
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
果胶裂解酶检测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/48样 | FS-01S63894 |
商品介绍：
测定意义
果胶裂解酶（EC4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，是一种能降解植物细胞壁，导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶，来源比较广泛，主要来源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的纯化，纸浆的漂白和纺织品的生物精炼，在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。
测定原理：
果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键，生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在235nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、恒温水浴锅。
产品内容：
公司产品仅用于科研酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
碱性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 1.5mL×1 支，4℃保存
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.6mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；
试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 1.9mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；
试剂五：液体 0.7mL×1 支，4 ℃保存；
试剂六：液体 10mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂七：自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。
操作步骤：
一、NAD+和 NADH 的提取：
1、血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取：
NAD+的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min；取上清 200uL，加入等体积碱性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。
NADH 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 碱性提取液，煮沸 5min(盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取：
NAD+的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积碱性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：
NAD+的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 碱性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。
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注意事项：
1、操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时，建议稀释后测量，计算公式中应当乘以稀释倍数。
