商品介绍:
测定意义
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC,EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中,催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,是糖异生过程的第一个限速酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
测定原理:
PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm下测定NADH氧化速率,即可反映PC活性
需自备的仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品属性:
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
PC丙酮酸羧化酶检测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/96样 | FS-01S63858 |
产品内容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 1.5mL×1 支,4℃保存
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 1.6mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 1.9mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂五:液体 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。
操作步骤:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
注意事项:
1、公司产品仅用于科研操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时,建议稀释后测量,计算公式中应当乘以稀释倍数。
下列是公司正在热销的产品:
鸡脾脏酪激(SYK)联免疫试剂盒 酿酒酵母Human CFP (Complement Factor P) ELISA Kit
鸡胸腺嘧核苷磷化(TP)联免疫试剂盒巨大芽孢杆 AHuman C3a (Complement Component 3a) ELISA Kit
鸡GATA结合蛋白3(GATA3)联免疫试剂盒嗜松青霉Human C3bR (Complement Fragment 3b Receptor) ELISA Kit
鸡糖基化磷脂酰肌特异性磷脂D1(GPLD1)联免疫试剂盒腐皮镰孢Human C3b (Complement Fragment 3b) ELISA Kit
鸡IX型胶原α3 (COL9α3)联免疫试剂盒韩国海杆状Human C3c (Complement Fragment 3c) ELISA Kit
鸡脂质运载蛋白2(LCN2)联免疫试剂盒山原申氏Human NPYR2 (Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit
鸡β受体(LTβR)联免疫试剂盒 泡囊短波单胞Human C4b (Complement Component 4b) ELISA Kit
鸡糖抗原125(CA125)联免疫试剂盒 黄色孢链霉Human C5c (Complement C5 Convertase) ELISA Kit
鸡线粒体肌激1B(CKMT1B)联免疫试剂盒 孟氏假单胞Human C5b (Complement Fragment 5b) ELISA Kit
鸡血小板衍生生长因子C(PDGFC)联免疫试剂盒Cecembia sp.Human NPYR5 (Neuropeptide Y Receptor Y5) ELISA Kit
鸡山梨脱氢(SDH)联免疫试剂盒大肠埃希氏Human ConA (Concanavalin A) ELISA Kit
鸡磷脂酰肌特异性磷脂Cγ2(PLCγ2)联免疫试剂盒球孢白僵Human CTGF (Connective Tissue Growth Factor) ELISA Kit
鸡单核趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)联免疫试剂盒 环圈链霉Human CTAPIII (Connective Tissue Activating Peptide III) ELISA Kit
鸡外信号调节激(ERK)联免疫试剂盒 球孢白僵Human CX26 (Connexin 26) ELISA Kit
鸡活化Ⅻ(FⅫa)联免疫试剂盒 斑形叶点霉Human CX31 (Connexin 31) ELISA Kit
PC丙酮酸羧化酶检测试剂盒微量法硝 99.99% metals basis壬 97%VTG ELISA Kit 鲤鱼卵黄蛋白原
硝 99.997% metals basis壬 98%GnRH ELISA Kit 鱼类促性腺释放
高氯 CP,70.0-72.0%季戊四 AR,98.0%Fish Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit 鱼类状腺原
高氯 AR,70.0-72.0%乙二 99.4%Fish Cortisol ELISA Kit 鱼类皮质
高氯 70%, 99.999% metals basis三钠 97%Fish high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit 鱼类超敏C反应蛋白
高氯 GR,70.0-72.0%三 97%Fish Oste ocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit 鱼骨钙/骨谷蛋白
高氯 ACS, ≥69% (T)阿斯巴甜 98%Cherax quadricarinatus lipovilin/vilin,Lv/Vn ELISA Kit 红螯光壳螯虾卵黄脂磷蛋白/卵黄磷蛋白
氯化 ≥99.99% metals basis碳镉 AR,98%Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV ELISA Kit 罗氏沼虾诺达病