花生凝集素(PNA)改性环糊精β-CD化合物
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花生凝集素(PNA)改性环糊精β-CD化合物
产品介绍β-环糊精(β-CD)是一类具有特的呈立体锥形中空结构的环状低聚糖的简称,它们有较好的热稳定性,不易吸湿结块,在碱性介质中能够稳定存在。β-CD特的性质为具备“外亲水,内疏水”的特征,其疏水腔可嵌入多种多样的客体化合物,形成主-客体包结复合物。另外,β-CD外侧上端由C2和C3的仲羟基构成,下端由C6的伯羟基构成,使得β-CD外表面具有亲水性,与亲水客体分子间具有亲水作用力。由于β-CD的特魅力,在分离富集等多重领域中被应用。利用β-CD特的性质将其作为吸附材料,改性有机聚合物整体柱以萃取效率,制备出整体材料集β-CD的特点和整体材料多通道、多孔性等性质于一体,将此类基于β-CD的整体柱制备成PMME装置与质谱仪器联用,用于复杂生物样品中糖蛋白或糖肽的分离与检测。具体的实验内容分为以下四个部分:1.制备了糖簇(glycocluster)分子接枝的β-CD化合物(glycoβ-CD),再利用巯烯点击化学法将glycoβ-CD键合到聚(甲基丙烯酸羟乙酯-co-三丙烯酸酯)整体柱中,将此方法与质谱联用并富集检测复杂样品中的糖肽。考察了聚合物整体材料制备过程中各反应物优化的比例。将所制备的较佳比例的聚合物制备成萃取装置,优化的萃取条件下,考察了所制备的改性后的聚合物整体柱在糖蛋白标准样品、糖蛋白与非糖蛋白混合样品与实际样品中对糖肽的选择性。随后,采用人淋巴细胞系(U937)裂解液为实际样品,考察了方法的灵敏度、稳定性和重现性,处理后的样品进行加标实验,测得回收率为(80.2±2.6)%(n=3)。2.制备了一种花生凝集素(PNA)改性的β-CD化合物,利用化学键合手段将PNA-β-CD化合物修饰到聚(甲基丙烯酸羟乙酯-co-乙二醇二甲基丙烯酸酯)整体柱上,随后,将所制备的聚合物整体柱微萃取装置与质谱仪进样口连接进行在线解吸检测复杂样品中的半乳糖糖基化糖肽。考察了整体材料制备过程中各反应物的比例对聚合物形貌、通透性及溶胀效应的影响,优化得到较佳的合成条件。随后,将整体柱制备成微萃取装置与结合质谱进行富集、清洗、排空和在线解吸步骤。实验中,考察了在线解吸步骤的一系列条件。在较佳实验条件下,分别应用于检测血液样品和人急性髓系白血病细胞(Molm-13)样品中的半乳糖糖基化肽段。该方法的检出限为0.5 fmol,整体柱批次与批间度分别为1.3%和4.2%,方法基质效应为(0.85–1.21)±0.03。将富集后得到的人血清样品糖肽数据通过数据库搜索软件解析,鉴定到137个N-糖基化位点和对应的101种糖蛋白。3.制备了一种基于赖氨酸(Lys)修饰的β-CD的吸附材料并用于性的检测复杂样品中的纤溶酶原蛋白。先通过巯烯点击反应将Lys连接在β-CD上,随后,通过加成反应将(biotin)接枝到甲基丙烯酸羟乙酯基质(HEMA)上,后,通过主客体作用将与Lys-CD化合物结合。将所制备的HEMA-biotin-Lys-CD主客体化合物通过HEMA上的双键键合到以甲基丙烯酸(MMA)为单体的整体材料中,得到聚(MMA-HEME-biotin-Lys-CD)整体柱
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