细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人肾癌Wilms细胞；G401说明书准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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产品描述：
细胞名称 人肾癌Wilms细胞；G401说明书
形态特性上皮样
生长特性贴壁生长
特征特性该细胞来源于一名3个月大的婴儿的肾Wilms瘤，由于该类肿瘤分类的改变，经Garvin等鉴定后发现该细胞来源于肾横纹肌样瘤。该细胞分泌肾母细胞生长因子（nephroblastgrowthfactor，NB-GF)。
培养条件McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
传代方法1:3传代；3~4天1次。
传代情况C5
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测培养法（-）
STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：11，13；D13S317：9，14；D16S539：12；D18S51：14；D19S433：13，14；D21S11：31，32.2；D2S1338：18，24；D3S1358：16，18；D5S818：13；D7S820：11，14；D8S1179：13，14；FGA：24，27；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：16；
同工酶
染色体亚二倍体，XY
注意事项：
1.一般客户拿到人肾癌Wilms细胞；G401说明书后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
uPA*人尿激酶型纤溶酶原激活物规格48T/96T
UK*人尿激酶规格48T/96T
UP*人尿蛋白规格48T/96T
GDI*人鸟苷酸解离抑制因子规格48T/96T
GEF*人鸟苷酸交换因子规格48T/96T
ODC*人鸟氨酸脱羧酶规格48T/96T
ODC*人鸟氨酸脱羧酶规格48T/96T
OCT*人鸟氨酸氨基甲酰转移酶规格48T/96T
FAK*人黏着斑激酶规格48T/96T
MAdCAM-1*人黏膜地址素细胞黏附分子规格48T/96T
人肾癌Wilms细胞；G401说明书SnakepoisonProtein蛇毒蛋白SnakepoisonProtein蛇毒蛋白1mgSnakepoisonProtein蛇毒蛋白
突触相关膜蛋白25抗原SNAP-25(synaptosomal-associatedprotein25)突触相关膜蛋白25抗原0.5mgSNAP-25(synaptosomal-associatedprotein25
Socs1(suppressorofcytokinesignaling1)细胞激酶信号-1抑制剂（抗原）0.5mgSocs1(suppressorofcytokinesignaling1
细胞因子信号传导抑制蛋白3抗原Socs3(suppressorofcytokinesignaling3)细胞因子信号传导抑制蛋白3抗原0.5mgSocs3(suppressorofcytokinesignaling3
超氧化物歧化酶1抗原SOD1(superoxide-dimutase-1)超氧化物歧化酶1抗原0.5mgSOD1(superoxide-dimutase-1
超氧化物歧化酶2抗原SOD2(superoxide-dimutase-2)超氧化物歧化酶2抗原0.5mlSOD2(superoxide-dimutase-2
solutecarrierfamily1溶质携带物家族-1(抗原)0.5mgsolutecarrierfamily1溶质携带物家族-1(抗原
Somatostatin/GRIH生长抑素抗原Somatostatin/GRIH生长抑素抗原0.5mgSomatostatin/GRIH生长抑素抗原
冷冻保存细胞之方法：
人肾癌Wilms细胞；G401说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
