细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0922说明书准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品描述：
细胞名称 EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0922说明书
形态特性淋巴母细胞样
生长特性悬浮生长
特征特性该细胞系来源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
传代方法1:2传代；5-6天一次
传代情况P2
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测荧光法（-）
STR-
同工酶
染色体
注意事项：
1.一般客户拿到EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0922说明书后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
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CK-18*人细胞角蛋白18规格48T/96T
ICAM-3/CD50*人细胞间粘附分子3规格48T/96T
ICAM-2/CD102*人细胞间粘附分子2规格48T/96T
ICAM-1/CD54*人细胞间粘附分子1规格48T/96T
CDC*人细胞分裂周期基因规格48T/96T
CDC*人细胞分裂周期基因规格48T/96T
CTLA-4/CD152*人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4规格48T/96T
CagA*人细胞毒素相关蛋白A规格48T/96T
CTX*人细胞毒素规格48T/96T
IAP*人细胞凋亡抑制因子规格48T/96T
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0922说明书Oxytetracycline/BSA土霉素偶联牛血清白蛋白Oxytetracycline/BSA土霉素偶联牛血清白蛋白2mgOxytetracycline/BSA土霉素偶联牛血清白蛋白
Oxytetracycline/OVA土霉素偶联鸡卵白蛋白Oxytetracycline/OVA土霉素偶联鸡卵白蛋白2mgOxytetracycline/OVA土霉素偶联鸡卵白蛋白
磷酸化β-连环蛋白抗原p-Betacatenin(p-betaCatenin(phosphor-Y142))磷酸化β-连环蛋白抗原0.5mgp-Betacatenin(p-betaCatenin(phosphor-Y142
P16/CDKN2A(Cyclin-dependentkinaseinhibitor-2A)抑癌基因p16（抗原）0.5mgP16/CDKN2A(Cyclin-dependentkinaseinhibitor-2A
P19ARFp19ARF抑癌基因抗原P19ARFp19ARF抑癌基因抗原0.5mgP19ARFp19ARF抑癌基因抗原
p21/WAF1/CIP1p21核分裂抑制因子之一（抗原）0.5mgp21/WAF1/CIP1p21核分裂抑制因子之一（抗原
p27(cyclin-dependentkinaseinhibitor1B)p27(抗原)0.5mgp27(cyclin-dependentkinaseinhibitor1B
增殖潜能相关蛋白抗原P2P-R/RBBP6(proliferationpotentialproteinrelated)增殖潜能相关蛋白抗原0.5mgP2P-R/RBBP6(proliferationpotentialproteinrelated
冷冻保存细胞之方法：
EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0922说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
