细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
中文名称:中性红染色液(活细胞专用)
英文名称:
产品规格:100ml
产品货号:BJ-01X6703
用途: 用于外周血细胞的活体染色,也可以用于其它活体细胞或组织的染色。 注意事项: 细胞核染成红色,细胞核中的核酸呈酸性,因此细胞核会被染成红色。由于溶酶体(lysome)中也是酸性环境,因此溶酶体也是可以被中性红染色液染成红色的。 储存条件:室温,12个月 |
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
10%NaCl胰胨水 20支 0.156-10 ng/mL 人角蛋白19(KRT-19)ELISA试剂盒
2 ug pN3 pN3 低温运输,-20℃保存 0.156-10 U/L ELISA Kit for Human Angiogenin
1 管 Rosetta(DE5)大肠杆菌 15.6-1000 pg/mL 人转录因子GATA5(Transcription factor GATA-5)ELISA试剂盒
5mL MgCl2溶液,25mM,PCR级 MgCl2,PCR Grade -20℃保存卵黄琼脂基础(MYP) 进口、国产Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base用于蜡样芽孢杆菌的固体平板计数(GB.SN标准)250
50T 霍乱弧菌01和0139CR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人胎盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒
250g 干粉型TB培养基 TB Medium Powder 常温
1瓶 Mv.1.Lu(NBL-7)株 Mv.1.Lu(NBL-7) 低温运输和保存NAC琼脂培养基进口、国产NAC Agar Medium100克假单胞菌属分离培养
10000U 冷启动核酸 Cold-active Nuclease 4℃遮光保存 0.156-10 ng/mL 猪内源性逆转录病毒(PERV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)
100mL 通用洗柱液 0.625-40 ng/mL 人促肾上皮质激素释放激素结合蛋白(CRHBP)ELISA试剂盒
20次 天净沙Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 Ribo-SPIA RNA Amplification Kit -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人自噬蛋白1(BECN1)ELISA试剂盒
100 mg DiIC1(5) 化物 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
中性红染色液(活细胞专用)N6培养基(不含琼脂和蔗糖) 英文名称:N6 Medium 产品规格:250g
人TAR DNA结合蛋白43(TARDBP/TDP43)免疫试剂盒进口、组装
猪化乙酰辅A羧化(pACCase)免疫试剂盒进口、组装
犬泛素蛋白(Ub)免疫试剂盒现货供应
小鼠神经肽Y(NPY)免疫试剂盒现货供应
马β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)免疫试剂盒*直销
小鼠苯丙(LPA)免疫试剂盒*直销
大鼠循环免疫复合物(CIC)免疫试剂盒*直销
兔子促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒现货供应
大鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)免疫试剂盒进口、组装
人异质性胞核核糖核蛋白H(hnRNP H)免疫试剂盒进口、分装