Annexin-V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以融合蛋白Annexin Ⅴ-EGFP作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

产品特色
简便、快捷、准确。

成分
Annexin V-EGFP：12.5 µl
Propidium Iodide (PI) ：125 µl
1×Binding Buffer：12.5 ml

保存条件
2-8℃ 储存，有效期一年。

使用方法
1.调整待测细胞的浓度为5×105个/ml；
2.取1 ml细胞，1000 rpm，4℃离心10分钟，弃上清；
3.加入1 ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮；
4.1000 rpm，4℃离心10分钟，弃上清；
5.重复步骤3、4两次；
6.对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤；
7.将细胞重悬于200 µl Binding Buffer；
8.加入0.5 µl Annexin V-EGFP和5 µl PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30分钟。加入300 µl Binding Buffer，在1小时内上机检测；
9.若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。

操作注意要点                                                                           
1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作；
2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变；
3.Annexin V-EGFP和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光；
4.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的；
5.在细胞洗涤的zui后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果；
6.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首*行Annexin V-EGFP染色，上机前5分钟再加入PI染色。

注意事项
1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；
2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落；
3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用；
4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断；
5.细胞的洗涤同常规方法。