2024年01月31日 10:57上海远慕生物科技有限公司点击量：173
中文名称：大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
英文名称：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
产品规格：0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率不低于107，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种。
| 基因型 | 表现型 |
| deo R | 组成型合成脱氧核糖 |
| end A1 | 核酸内切酶I缺失 |
| gyr A96 | 具有萘啶酮酸抗性 |
| hsd R17 | 限制性酶EcoK缺失 |
| △(lac)U169 | lac基因缺失 |
| rec A1 | DNA重组活性降低 |
| Rel A1 | 允许在无蛋白质合成时有RNA合成 |
| sup E44 | 抑制琥珀突变突变，为某些噬菌体必需 |
| thi-1 | 不能自身合成硫氨 |
| φ80(lac ZΔM15) | 提供α-互补所需的ω片断 |
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm(小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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