人红细胞生成素受体（EPOR）ELISA试剂盒技术应用

上海博研科研试剂网为您提供的“人红细胞生成素受体（EPOR）ELISA试剂盒技术应用”*，现货直销，免费提供代测服务！ 咨询 ！                                  

                        人红细胞生成素受体（EPOR）ELISA试剂盒技术应用

本试剂盒仅供研究使用。                                                                                            96T
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 红细胞生成素受体（EPOR） 含量。

 实 验 原 理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人红细胞生成素受体水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人红细胞生成素受体抗原、*化的人红细胞生成素受体抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人红细胞生成素受体呈正相关。
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人红细胞生成素受体（EPOR）ELISA试剂盒技术应用Function : The erythropoietin receptor （EPOR） is a member of the cytokine receptor family. There are several isoforms including: EPOR-F （full length）, EPOR-S （soluble form）, and EPOR-T （truncated form）. Upon erythropoietin （EPO） binding, the EPOR activates Jak2 tyrosine kinase which activates different intracellular pathways including: Ras/MAP kinase, phosphatidylinositol 3-kinase and STAT transcription factors. The stimulated EPOR appears to have a role in erythroid cell survival. Defects in the EPOR may produce erythroleukemia and familial erythrocytosis. A functional EPOR is found in the cardiovascular system, including endothelial cells and cardiomyocytes, and data suggest that the EPO/EPO receptor system plays an important role in cardiac function. In animal studies, treatment with EPO during ischemia/reperfusion in the heart has been shown to limit the infarct size and the extent of apoptosis.
Subunit : Forms homodimers on EPO stimulation. The tyrosine-phosphorylated form interacts with several SH2 domain-containing proteins including LYN, the adapter protein APS, PTPN6, PTPN11, JAK2, PI3 kinases, STAT/B, SOCS3, CRKL. Interacts with INPP5D/SHIP1. The N-terminal SH2 domain of PTPN6 binds Tyr-454 and inhibits signaling through dephosphorylation of JAK2. APS binding also inhibits the JAK-STAT signaling. Binding to PTPN11, preferentially through the N-terminal SH2 domain, promotes mitogenesis and phosphorylation of PTPN11. Binding of JAK2 （through its N-terminal） promotes cell-surface expression. Interaction with the ubiquitin ligase NOSIP mediates EPO-induced cell proliferation. Interacts with ATXN2L.

试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（240 ng/L）0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120 ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
60 ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
30 ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
15 ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
7.5 ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
 注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月