2023年08月30日 14:50上海古朵生物科技有限公司点击量：782
WB实验蛋白marker，内参的重要性
严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在。良好的参照体系通常包括分子量Marker(用来确定蛋白条带对应的分子量大小)，空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照)，已知量标准产物的正对照;另外还有内参。内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。蛋白含量是肯定要测的。首先合适的上样蛋白，western图才比较比较美观。而且对于需要半定量的western，那是肯定要测含量后再做western了。
1.marker呢，就相当于一把标尺，用于验证你的目的蛋白的分子量，比如你的marker上有30和35kD的蛋白条带，而你的目的蛋白是32kD，跑胶以后你如果看到你的目的蛋白条带在30和35kD之间，就可以初步断定是你的目的蛋白。
2. 内参呢，内参也叫看家基因，在组织或细胞中都会表达，且表达量在不同组织或细胞中几乎是相同的，一般有β-ACTIN，GAPDH等。其作用有二，1. 是看提取蛋白质量的好坏。如果做western的时候，内参照蛋白有条带，而目的蛋白没有，说明蛋白的提取和转膜等步骤没有问题，是目的蛋白的抗体质量不好或者是稀释倍数不对。2. 是比较客观的说明目的蛋白的表达情况，消除上样量等的误差。不同的标本之间由于蛋白提取的量有差别，可能强阳性的表达跑出来的带很弱。因此设立内参照，比较不同标本之间的表达情况。
3. 测一下蛋白浓度再上样，这样好点。当然也看你的实验室是定性还是定量了，定性的话，我觉得可以不用测浓度;要是准备定量，还是尽量保证上样量一致吧。
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