2023年06月02日 16:46武汉艾美捷科技有限公司点击量：233
骆驼科产生由 2 条重链和 2 条轻链组成的常规抗体，这些抗体与 Y 形的二硫化物键结合在一起。然而，它们也产生免疫球蛋白G的独-特亚类，也称为重链IgG（hcIgG）。
这些抗体仅由两条没有CH1区域的重链和在其N末端的抗原结合域（称为VHH）组成。
hcIgG的独-特之处在于其单体抗原结合区（VHH）能够结合具有特异性、亲和力，尤其是多样性的抗原，与传统抗体相当，而无需与其他区域配对。使用分子工程可以产生VHH碎屑。
为什么要使用艾美捷Covalab VHH片段？
结合隐藏的表位：
它们的空间位阻减少，使它们能够到达传统抗体无法获得的难以获得的抗原，例如酶的活性位点（有助于抑制酶活性）以及较小的酶，例如溶-菌-酶或核糖核酸酶。
更好的渗透性：
与传统抗体相比，它们穿透组织的能力增强，在进行免疫组织化学时可以更精确地对组织切片进行染色。
更稳定：
VHH区域的高再折叠能力使它们在热力学上更加稳定，并能抵抗高温（高达70°C / 158°F）和极-端pH值，如胃酸。
Covalab艾美捷丨VHH开发：
1-骆驼免疫接种
免疫：
根据Covalab的 88 天方案，免疫步骤包括 4 次注射和 2 次测试出血。
监测：
免疫反应性通过为该项目开发的检测方法进行监测。
2-噬菌体文库构建
PBMCs分离和RNA提取：
从最终出血中分离外周血单核细胞（PBMC）并提取总RNA。
cDNA合成和VHH扩增：
RT-PCR 和 VHH 抗体片段扩增
特异性引物设计用于在VHH编码区域内进行逆转录，第二次嵌套PCR允许cDNA扩增。
噬菌体载体克隆：
VHH编码基因被整合到噬菌体载体中，然后用于转化感受态细菌以产生噬菌体文库。
3-平移
目标交互：
将抗原固定在微量滴定板孔的底部，将噬菌体制剂加载到孔中，使其通过在其表面表达的VHH结合抗原。
放大：
洗掉未结合的噬菌体后，剩余的噬菌体被转导成感受态细菌进行富集和扩增。
选择：
在每个淘选阶段结束时，分离编码抗原特异性VHH的cDNA
4- 生产和净化
表达载体中的亚克隆：
插入片段被整合到表达载体中，然后用于转化感受态细菌。
培养、裂解和亲和色谱纯化：
通过亲和色谱从培养物上清液中纯化特异性VHH。
所有编码特定VHH的cDNA都保存在我们的实验室中。
Covalab专注于抗体研发领域，涵盖抗体和试剂盒。拥有多种针对流行和罕见靶标的一抗，涉及多种应用领域，如癌症，表观遗传学，细胞信号传导，心血管等疾病的生物标志物，神经系统，离子通道，微生物学，病毒学等。还有特色的应用于模式动物斑马鱼的抗体。此外还有各种ELISA试剂盒，ELISPot试剂盒，FluoroSpot试剂盒等。艾美捷科技是Covalab的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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