细胞株检验方法

细胞株检验方法
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
注意事项
1. 在使用前，一抗二抗均应测试其合适的稀释度。
2. 多聚甲醛的固定是不稳定的，标本经多聚甲醛固定后，应再用去污剂处理，如果标本在水溶液中浸泡的时间过长，则会使交联结构解体。因此，应避免固定后的标本在水溶液中浸泡的时间过长。
3. 信号微弱的解决方法：
① 提高一抗和二抗的浓度以增强敏感性 ，这必须测试各种浓度抗体的滴度；
② 延长一抗和二抗的孵育时间。由于细胞染色时抗原吸附在固相载体上，抗原抗体结合时间较在溶液中长。孵育时间可因实验设计作适当调整，但少于20min抗体和抗原几乎不能有效结合。在以上两点中，应摸索出一个条件以产生有效信号且保持良好的背景。这就需要反复试验，因为每组抗体和抗原的情况会有所不同；
③ 改变检测方法，用共聚焦显微镜观察，可提高敏感性。
细胞株Col    I 型胶原细胞检测试剂盒    48 tests/48 well plate
Fibro    纤维母细胞粘附检测试剂盒    48 tests/48 well plate
MTT    MTT细胞活力和增殖检测试剂盒    1000 tests/96 well plate
WST    WST-1细胞活力和增殖检测试剂盒    1000 tests/96 well plate
CSA    细胞衰老检测试剂盒    50 tests/53 mm plate
GalC    β-半乳糖苷酶比色检测试剂盒    50 tests/53 mm plate
LDH    LDH细胞毒性检测试剂盒    500 tests/96 well plate
TUNEL    TUNEL色标法细胞凋亡检测试剂盒    50 tests/96 well plate
NO    一氧化氮色标法检测试剂盒    250 tests/96 well plate
pNPP    硝基苯磷酸钠（pNPP）磷酸酶检测试剂盒    500 tests/96 well plate
MGmP    孔雀绿磷酸盐检测试剂盒    2500 tests/96 well plate
CCA    比色法钙分析试剂盒    250 tests/96 well plate
CSK    活/死细胞染色试剂盒    1000 tests/96 well plate
GAPDH    比色法GAPDH分析试剂盒    1000 tests/96 well plate
IVTFA    体外管腔形成分析试剂盒    50 tests/96 well plate
TACA    总抗氧化能力检测试剂盒     100tests
C3DGK    胶原I-3D凝胶试剂盒    100mg
CCCSCK        
SOD    超氧化物歧化酶分析试剂盒    100tests
MYCO    支原体PCR检测试剂盒    100tests
CAT    过氧化氢酶活性分析试剂盒    100tests
CAS    细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒    100tests
GPX    *过氧化物酶分析试剂盒    100tests
EndoFectagen® 内皮细胞转染试剂盒        250 Transfections
FibroFectagen® 成纤维细胞转染试剂盒        200 Transfections
EpiFectagen® 上皮细胞转染试剂盒        100 Transfections
MesenFectagen® 间充质干细胞转染试剂盒        250 Transfections
AstroFectagen®星形细胞转染试剂盒        250 Transfections
KeratoFectagen® 角质细胞转染试剂盒        200 Transfections
SMCFectagen® 平滑肌细胞转染试剂盒        250 Transfections
NeuroFectagen® 神经细胞转染试剂盒        200 Transfections细胞株