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“PG-BE1细胞,人肺巨细胞癌(PG)的高转移亚系"品质保障,咨询,我们将竭诚为您服务,细胞一周质保,出现任何质量问题可免费包换。!
产品名称:PG-BE1细胞,人肺巨细胞癌(PG)的高转移亚系
基本特性:
细胞数量:100万个细胞数
细胞传代:到客户手上是3代以内的
细胞周期的DNA检测
Ⅰ、样品准备 准备以下一种或几种样品
A、组织单细胞悬浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞)
B、组织培养细胞
C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞
Ⅱ、反应体系-DNA低渗缓冲液
柠檬酸三钠 0.25g
Triton-X 100 0.75ml
Propidium iodide 0.025g
核糖核酸酶 0.005g
蒸馏水 250ml
我们将该DNA低渗溶液于密闭瓶子中存放数月后并无发现有任何染色活性的丢失
Ⅲ、染色
1、 每一个管子中放入1×106个细胞;
2、 样品离心后尽可能*地移去上清液,并且不要打碎沉淀块; 3、 入1ml的DNA低渗染色(可用甲基绿进行染色)缓冲液至沉淀中,并混匀;
4、 样品于4℃下避光30分钟或zui长不超过1个小时以备流式细胞仪分析 。
注意:延长在低渗缓冲液的曝光时间会引起样品碎片的增加。
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下面是有关细胞株,菌株培养的具体无菌技术:
1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株的操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的*无菌区域,勿在边缘的非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌的实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口,亦不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身的安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染的细胞株应特别小心操作,并选择适当等级的无菌操作台(至少Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 的产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头的伤害等。
5. 定期检测下列项目:
5.1. CO2 钢瓶的CO2 压力
5.2. CO2 培养箱的CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。
5.3. 无菌操作台内的airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水.
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