人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白异质体 3(AFP-L3)水平。用纯化的人
甲胎蛋白异质体 3(AFP-L3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入
甲胎蛋白异质体 3(AFP-L3)，再与 HRP 标记的甲胎蛋白异质体 3(AFP-L3)抗体结合，形成抗
体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转
化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白异质体
3(AFP-L3)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样
品中人甲胎蛋白异质体 3(AFP-L3)浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
：021 60340850 021 60340830 021 60340820
客服 ：372584443 1091953152 827774711
人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)Elisa试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1600ng/L
5 号标准品
150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
800ng/L
4 号标准品
150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
400ng/L
3 号标准品
150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
200ng/L
2 号标准品
150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
100ng/L
1 号标准品
150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
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