牛肿瘤坏死因子α(TNF-α)Elisa试剂盒操作步骤
1.
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
240ng/L
5 号标准品
150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
120ng/L
4 号标准品
150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
60ng/L
3 号标准品
150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
30ng/L
2 号标准品
150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
15ng/L
1 号标准品
150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.
配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
5.
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.
温育：操作同 3。
8.
洗涤：操作同 5。
9.
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
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牛肿瘤坏死因子α(TNF-α)Elisa试剂盒标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
