鸡新城疫抗原（NDV Ag）Elisa试剂盒操作步骤
1.
编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.
加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.
配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.
温育：操作同 3。
8.
洗涤：操作同 5。
9.
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
鸡新城疫抗原（NDV Ag）Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡传新城疫抗原（NDV Ag）表达。用纯化的抗体包
被微孔板，制成固相抗体，可与样品中新城疫抗原（NDV Ag）相结合，经洗涤除去未结合
的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-抗体复合物，经过*洗
涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终
的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定
标本中鸡新城疫抗原（NDV Ag）的存在与否
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