博研生物：免疫组化操作流程
阅读：394发布时间：2013-1-5
专业的抗体供应商博研生物为您推荐：
免疫组化操作流程
（一）仪器设备
1.18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.
2.水浴锅
（二）试剂
1.PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,
KH2PO41.4mmol/L.
2．0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。
3．0.5mol/LEDTA缓冲液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA&
8226;2H2O,用10mmol/L
NaOH调至ph8.0,加水至1000ml.
4.1mol/L的TBS缓冲液（ph8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至ph8.0,加水1000ml。
5.酶消化液：a.0.1%*：用0.1%CaCl12（ph7.8）配制。b.0.4%*液：用0.1N的HCl配制。
6.3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制
7.风裱剂：a.甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（ph9.0–9.5）等量混合
b油和TBS（PBS）配制
8．TBS/PBSPH9.0–9.5,适用于荧光纤维镜标本;ph7.0-7.4适合光学纤维标本。
（三）操作流程
1脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。a组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后在浸泡10分钟
b无水乙醇中浸泡五分钟
c95%乙醇中浸泡五分钟
d75%乙醇中浸泡五分钟
2抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片：
A抗原热修复
a高压热修复在沸水中加入EDTA（ph8.0）或0.01m*缓冲溶液（ph6.0）.盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。将玻片置于金属染色加上，缓慢加压，是玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
b沸热修复电炉或水浴锅加热0.01*缓冲液（ph6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10-15分钟。
C微波炉加热在微波炉里加热0.01*缓冲液（ph6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5-10分钟，反复1-2次。适用的抗原：
Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.
ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等
B酶消化方法
常用0.1%*和0.4%*液。*使用前预热37℃，消化时间约为5-30分钟。适用于被固定遮蔽的抗原：包括Collagen.GFAP.
Complement.Cytokeratin.C-erB-2.LCA.LN.等
3免疫组化染色
SP法
（1）脱蜡、水化（2）PBS洗2-3次各5分钟（3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在
TMA上，室温静置10分钟（4）PBS洗2-3次各5分钟（5）抗原修复
（6）PBS洗2-3次各5分钟（7）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟，甩去多余液体（8）滴加Ι抗50μl,室温静置1小时或4℃过夜或37℃1小时（9）4℃过夜后需在37℃复温45分钟（10）PBS洗3次每次2分钟
（11）滴加Ⅱ抗45-50μl,室温静置或37℃1小时（12）Ⅱ抗中可加入0.05%的
tween-20.（13）PBS洗3次各5分钟（14）DAB显色5-10分钟，在显微镜下掌握染色程度（15）PBS或自来水冲洗10分钟（16）苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化（17）自来水冲洗10-15分钟（18）脱水、透明、封片、镜检。
SABC法
（1）脱蜡、水化（2）PBS洗2次各5分钟（3）用蒸馏水或PBS配制新鲜的3%H2O2，室温封闭5-10分钟，用蒸馏水洗3次（4）抗原修复
（5）PBS洗5分钟（6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟，甩去多余液体（7）滴加Ι抗50μl,室温静置1小时或4℃过夜或37℃1小时
（8）PBS洗3次各2分钟（9）滴加*化Ⅱ抗，20℃-37℃20分钟
（10）PBS洗3次各2分钟（11）滴加试剂SABC20℃-30℃20分钟
（12）PBS洗4次各5分钟（13）DAB显色：试剂盒或自配显色剂显色
（14）脱水、透明、封片、镜检。
1126RAnti-5-HT抗体，5-羟色胺抗体
1124RAnti-5-HTR1A,5-羟色胺受体1A抗体
1125RAnti-5-HTR1B,5-羟色胺受体1B抗体
1892RAnti-5-HTR2B抗体
1056RAnti-5-HTR2A5-羟色胺受体2A抗体
1893RAnti-5-HTT/SERT,5-羟色胺转运蛋白抗体
2126RAnti-5-HTR35-羟色胺受体3抗体
2127RAnti-5-HTR45-羟色胺受体4抗体
0526RAnti-5-LOX,5-脂氧合酶抗体
1278RAnti-8-OHdG,8-羟基脱氧鸟苷抗体
1456RAnti-A2AR/AdenosineA2A-R,腺苷A2A受体抗体
0094RAnti-AACT-α1,α-1抗胰*抗体
1507RAnti-AAK1,AP2关联激酶1抗体
1512RAnti-AARS2,丙氨酰tRNA合成酶2抗体
1603RAnti-AARS2丙氨酰tRNA合成酶2抗体
0096RAnti-AAT,α-1抗*抗体
1510RAnti-AATK,细胞凋亡关联*激酶抗体
1229RAnti-AATF,拮抗凋亡转录因子抗体
1627RAnti-ABCA1,腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗体
1604RAnti-ABCB5,ATP结合蛋白家族5抗体
1224RAnti-ABCB6ATP结合蛋白家族6抗体
1960RAnti-ABCF1ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体
1231RAnti-ABCG1,三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗体
0662RAnti-ABCG2/BCRP/BXP-21，三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体
1727RAnti-ABCG4,抗ABC膜转运蛋白抗体
0583RAnti-ABL抗体,ABL1抗体
1230RAnti-ABL2/ARGABL2抗体
1961RAnti-ABI1/SSH3BP1,ABI1/SSH3BP1蛋白抗体
2410RAnti-ABP,雄激素结合蛋白抗体
0439RAnti-ACE1,血管紧张素转换酶抗体
1004RAnti-ACE2血管紧张素转换酶2抗体
0203RAnti-ACEI，血管紧张素1转换酶抑制剂抗体
1962RAnti-ACD/PTOP，肾上腺皮质发育异常蛋白抗体
2511RAnti-AchE抗体,乙酰*酶抗体
0120RAnti-Acinus抗体,腺泡Acinus抗体
1227RAnti-Ack1抗体,Ack1抗体
0443RAnti-ACTH抗体,促肾上腺皮质激素（1-39）抗体
0442RAnti-ACTH抗体,促肾上腺皮质激素（18-39）抗体
0004RAnti-ACTH抗体,促肾上腺皮质激素（7-23）抗体
0189RAnti-Actinα/α-SMA抗体,肌动蛋白α抗体
1741RAnti-α-ACTN4,抗体α-辅肌动蛋白4抗体
1571RAnti-F-Actin抗体,F-肌动蛋白抗体
0046RAnti-AD7C-NTP/NTP/AF抗体,神经丝蛋白抗体
2105RAnti-AD7C-NTP/NTP/AF抗体,神经丝蛋白抗体（人）
0720MAnti-AD7C-NTP/NTP/AF抗体,神经丝蛋白抗体
1208RAnti-ADAM-TS1/METH1,整合素样金属蛋白酶与*1型（抗体）
0433RAnti-ADAM-TS7抗体抗体,整合素样金属蛋白酶与*1型-7（抗体）
0733RAnti-ADAM-TS7抗体,整合素样金属蛋白酶与*1型-7抗体（N端抗体）
2167RAnti-DRADA/ADAR1抗体,Nterminal双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（N端）
2168RAnti-DRADA/ADAR1抗体,双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（C端）
1114RAnti-Adducinprotein抗体,内收蛋白抗体
1164RAnti-ADFP/ADRP/adipophilin抗体,脂肪组织分化相关蛋白抗体
1673RAnti-AEV抗体,禽脑脊髓炎病毒抗体
1385RAnti-ADAM-TS12抗体,整合素样金属蛋白酶与*1型-12抗体
1930RAnti-ADH/AVP抗体,抗利尿激素/血管升压素抗体
0610RAnti-AdipoR1抗体,脂联素受体-1抗体
0611RAnti-AdipoR2抗体,脂联素受体-2抗体
相关产品：更多产品请登入www.boyeelisa.com查询或在线客服！
