通常的表示方法是将吸收波长写于A字母的右下角，如OPD 的吸收波长为492nm，表示方法为"A492nm"或"OD492nm" 。在加底物液显色前，先将软板边沿剪净，这样，此板就可*平妥坐入座架中。因为ELISA测定中单个空缺孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空缺孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，所以在ELISA测定比色时，是使用双波长比色。ELISA试剂盒因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的长处。比色结果的表达以往通用光密度（oplical density，OD），现按划定用吸光度（absorbence，A），两者含义相同。
所谓的单波长比色等于通常的以对显色具有zui大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至一定值，ELISA试剂盒使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。
以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。zui后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。以软板为载体的试验，需先将板置于尺度96孔的座架中，才可进行比色。ELISA试剂盒比色时应先以蒸馏水校零点，测读底物孔（未经任何反应仅加底物液的孔）和空缺孔（以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔），以记实本次试验的试剂状况。
