大鼠ELISA试剂盒测定现通常为采用手工操纵的以微孔板条为固相的测定模式，测定操纵非常简 朴，一般涉及到标本的收集保留、试剂预备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判定和结果讲演及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结 果，大鼠ELISA试剂盒且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。溅出会对临近孔产生污染。
1. 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。大鼠ELISA试剂盒不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
2.包被抗体或抗原的选择：将抗体或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。ELIAS试剂盒蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
3. 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接大鼠ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法"，在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
