内容: 酶联免疫吸附法（ELISA） 原理：ELISA可用于测定抗体，也可用于检测杭原。其基本原理是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）； ②酶标记的抗原或抗体（标记物）； ③酶作用的底物（显色剂）。 ELISA过程包括：抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加待测抗体, 再加相应酶标记抗体，生成抗原--待测抗体--酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。 根据检测目的和操作步骤不同，有以下三种类型的常用方法：3.1间接法 此法是测定抗体zui常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体。加人待检标本（含相应抗体）与之结合。
洗涤后，加人酶标抗球蛋白抗体（酶标抗抗体）和底物进行测定。3.2双抗体夹心法 此法常用于测定抗原。将已知抗体吸附于固相载体，加人待检标本（含相应抗原）与之结合。温育后洗涤，加人酶标板中。3.3竞争法 此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。
以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体。加入待测抗原和一定量的酶标已知抗原，使二者竟争与固相抗体结合；经过洗涤分离，zui后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。一、酶联免疫吸附法测定抗体含量（竞争法）1、仪器设备酶联免疫检测仪（Bio－550）；酶标板 （96孔）；微量注射器。2、试剂（1）HRP标记羊抗兔Ig G（1:1 000，国产）；标准牛IgG；兔抗牛血清（1:256）；（2）包被液：0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液,4℃，保存, Na2CO3 0.15g, NaHCO3 0.293g,蒸馏水稀释至100 mL。 （3）稀释液与洗涤液：0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, ４℃，保存。NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4&12H2O 2.9g, Tween20，0.5mＬ。蒸馏水加至1000mＬ。（4）封
