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技术文章

大鼠ELISA试剂盒的实验挑选

阅读:330发布时间:2015-8-20

    采用间接竞争大鼠ELISA试剂盒方法,在酶标板微孔条上预包被T2毒素抗原,样本中T2毒素和此抗原竞争T2毒素抗体,同时T2毒素抗体与酶标二抗相结合,经TMB底物显色,样本吸光值与其含有的T2毒素成负相关,与尺度曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中T2毒素的含量。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品,对人类健康及畜牧业构成了较大危害。
灵敏度:0.2ppb
回收率:110±15%
精密度:试剂盒的变异系数均小于10%
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。
   人ELISA试剂盒适用范围:可定性、定量检测玉米、大米、豆类、花生、燕麦、饲料等样本中的T2毒素。
检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,大鼠ELISA试剂盒保存于2~8℃。不要冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加标准品/样本50l到对应的微孔中,加入T2毒素酶标物50l/孔,再加入T2毒素抗试剂50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300l/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,大鼠ELISA试剂盒轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15~20min。
8、测定:加入终止液50l/孔,轻轻振荡混匀,人ELISA试剂盒设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。


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