本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。大鼠ELISA试剂盒而非特异IgM由于其在*步温育中，可与特异IgM竞争与固相抗体结合，所以会影响测定的灵敏度。因此，使用本法测IgM，必须对临床样本进行适当稀释。样本稀释后，上述产生干扰作用的非特异IgM含量减少，而特异IgM由于处于相应病原体的急染期，滴度很高，一定稀释后，不会有明显影响，况且，在某些病原体如HBV的慢染阶段，IgM类特异抗体也能持续存在，只不过滴度要低很多。
1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。
2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，大鼠ELISA试剂盒待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。
3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。
4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。
因此，如不对血清样本稀释，就直接检测，即使是没有非特异IgM的干扰，阳性测定结果也没有急染的诊断价值。现在，有些试剂生产厂家，为了迎合临床实验室减轻劳动强度、大鼠ELISA试剂盒简便操作的要求，生产了不需对样本进行稀释的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA试剂盒，现有不少实验室也在使用。鉴于上面提到的原因，我们建议临床实验室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等类检测时，应使用对样本进行稀释的试剂盒，以保证检测的临床价值。
