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上海纪宁酶联科技有限公司
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人Smad7 ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
人Smad7 ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在人Smad7 ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
50426 MARCH7/Axotrophin 膜相关环指蛋白7抗体 0.2ml
50427 MARCH8 膜相关环指蛋白8抗体 0.2ml
50428 MARCH9 膜相关环指蛋白9抗体 0.2ml
50429 MARCH10 膜相关环指蛋白10抗体 0.2ml
50430 MARCH11 膜相关环指蛋白11抗体 0.2ml
50431 Proteasome 19S 10B 蛋白酶体PRS10B抗体 0.2ml
50432 Proteasome 19S S3 蛋白酶体PSMD3抗体 0.2ml
50433 ACPL2 酸性磷酸酶样蛋白2抗体 0.2ml
50434 Proteasome 19S S7 蛋白酶体PRS7抗体 0.2ml
50435 Proteasome 20S C2 蛋白酶体PSMα1抗体 0.2ml
50436 Proteasome 20S alpha 2 蛋白酶体PSMα2抗体 0.2ml
50437 Proteasome 20S alpha 3 蛋白酶体PSMα3抗体 0.2ml
50438 Proteasome 20S alpha 3(Ser250) 磷酸化蛋白酶体PSMα3抗体 0.1ml
50439 Proteasome 20S alpha 5 蛋白酶体PSMα5抗体 0.2ml
50440 Proteasome 20S alpha 6 蛋白酶体PSMα6抗体 0.2ml
50441 Proteasome 20S alpha 7 蛋白酶体PSMα7抗体 0.2ml
50442 Proteasome 20S beta 3 蛋白酶体PSMβ3抗体 0.2ml
50443 Proteasome 20S beta 6 蛋白酶体PSMβ6抗体 0.2ml
50444 Proteasome 20S beta 7 蛋白酶体PSMβ7抗体 0.2ml
50445 Proteasome 20S alpha + beta 蛋白酶体PSMα+β抗体 0.2ml
50446 Proteasome 20S alpha 1+2+3+5+6+7 蛋白酶体PSMα1+2+3+5+6+7抗体 0.2ml
50447 phospho-Proteasome 20S beta 7(Ser214) 磷酸化蛋白酶体PSMβ7抗体 0.2ml
50448 Proteasome 26S S2/TRAP2 肿瘤坏死因子受体相关蛋白2抗体 0.2ml
50449 LMP7 低分子量蛋白7抗体 0.2ml
50450 PSMD8 蛋白酶调解因子8抗体 0.2ml
50451 PSMD7 蛋白酶调解因子7抗体 0.2ml
50452 PSMD6/P44S10 蛋白酶调解因子6抗体 0.2ml
50453 OCEL1 紧密连接蛋白/小分子胶原蛋白OCEL1抗体 0.2ml
50454 ODF3B 外致密纤维蛋白3B抗体 0.2ml
50455 PGBD1/Cerebral protein 4 脑蛋白4抗体 0.2ml
50456 PGBD3 PGBD3蛋白抗体 0.2ml
50457 PGGT1β 香叶烯基转移酶1β抗体 0.2ml
50458 MYCBP2 MYC结合蛋白2抗体 0.2ml
50459 MURF3 肌肉特定环指蛋白3抗体 0.2ml
50460 MMS2/EDPF1 肠细胞分化相关因子1抗体 0.2ml
50461 MKRN1/RNF61 环指蛋白61抗体 0.2ml
50462 MKRN2/RNF62 环指蛋白62抗体 0.2ml
50463 MID1/Midline-1/RNF59 环指蛋白59抗体 0.2ml
50464 KF1/ZFP103 锌指蛋白103抗体 0.2ml
50465 CNOT2 细胞表面趋化因子受体4相关蛋白2抗体 0.2ml
50466 phospho-CNOT2(Ser101) 磷酸化细胞表面趋化因子受体4相关蛋白2抗体 0.2ml
50467 CNOT4 细胞表面趋化因子受体4相关蛋白4抗体 0.2ml
50468 CNOT6 细胞表面趋化因子受体4相关蛋白6抗体 0.2ml
50469 LRSAM1 LRSAM1蛋白抗体 0.2ml
50470 CNOT8 细胞表面趋化因子受体4相关蛋白8抗体 0.2ml
50471 MURF2 肌肉特异性环指蛋白2抗体 0.2ml
50472 MURF3 肌肉特异性环指蛋白3抗体 0.2ml
50473 SMURF1 Smad蛋白E3泛素连接酶1抗体 0.2ml
50474 p150 CAF1 染色质组装因子1P155抗体 0.2ml
50475 p55/DCAF1 染色质组装因子1P55抗体 0.2ml
50476 DCAF12/WDR40A 睾丸癌中心体相关蛋白抗体 0.2ml
50477 DCAF13 DCAF13蛋白抗体 0.2ml
50478 phospho-gp130(Ser 782) 磷酸化gp130抗体 0.2ml
50479 ANKRD33B 锚蛋白重复结构域蛋白33B抗体 0.2ml
50480 ANKRD37 锚蛋白重复结构域蛋白37抗体 0.2ml
50481 ANKRD40 锚蛋白重复结构域蛋白40抗体 0.2ml
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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