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上海纪宁酶联科技有限公司
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人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
38609 角鲨烷标准品 Squalane 500mg 111-01-3
38610 康力龙标准品 Stanozolol CIII 200mg 10418-03-8
38611 *标准品 Stavudine 250mg 3056-17-5
38612 *系统适用性用混合物标准品 10mg
38613 硬脂酸标准品 Stearic Acid 500mg 1957/11/4
38614 硬脂酰聚氧甘油酯标准品 Stearoyl Polyoxyglycerides 100mg
38615 硬脂醇标准品 Stearyl Alcohol 125mg 112-92-5
38616 甜菊糖标准品 Stevioside 30mg 57817-89-7
38617 琥珀酸/丁二酸标准品 Succinic Acid 100mg 110-15-6
38618 氯化琥珀*标准品 Succinylcholine Chloride 500mg 71-27-2
38619 氯琥珀酰单*标准品 Succinylmonocholine Chloride 150mg 5297-17-6
38620 蔗糖八乙酸酯标准品 Sucrose Octaacetate 500mg 126-14-7
38621 三氯蔗糖标准品 Sucralose 400mg 56038-13-2
38622 舒巴坦酸标准品 250mg 68373-14-8
38623 苯甲酰磺胺标准品 Sulfabenzamide 200mg 127-71-9
38624 *标准品 Sulfacetamide 300mg 144-80-9
38625 *钠标准品 Sulfacetamide Sodium 500mg 6209-17-2
38626 *标准品 Sulfachlorpyridazine 200mg 80-32-0
38627 *标准品 Sulfadiazine 200mg 68-35-9
38628 磺胺二甲氧嗪标准品 Sulfadimethoxine 200mg 122-11-2
38629 周效磺胺标准品 Sulfadoxine 200mg 2447-57-6
38630 磺胺甲基嘧啶标准品 Sulfamerazine 500mg 7-79-7
38631 *标准品 Sulfamethazine 1g 57-68-1
38632 磺胺甲噻二唑标准品 Sulfamethizole 200mg 144-82-1
38633 磺胺甲恶唑标准品 Sulfamethoxazole 200mg 723-46-6
38634 *N4- 葡胺标准品 Sulfamethoxazole N4-Glucoside 25mg 119691-75-7
38635 磺胺磺胺标准品 Sulfanilamide 5g 63-74-1
38636 磺胺熔点标准物标准品 500mg 63-74-1
38637 对氨基苯磺酸标准品 Sulfanilic Acid 200mg 121-57-3
38638 *标准品 Sulfapyridine 200mg 144-83-2
38639 *熔点标准物标准品 1g 144-83-2
38640 磺胺喹喔啉标准品 Sulfaquinoxaline 200mg 59-40-5
38641 磺胺喹喔啉相关物质A标准品 25mg
38642 *标准品 Sulfasalazine 125mg 599-79-1
38643 *标准品 Sulfathiazole 350mg 72-14-0
38644 苯磺*标准品 Sulfinpyrazone 200mg 57-96-5
38645 磺胺二甲异噁唑标准品 Sulfisoxazole 200mg 127-69-5
38646 磺胺乙酰异噁标准品 Sulfisoxazole Acetyl 200mg 80-74-0
38647 *标准品 Sulindac 200mg 38194-50-2
38648 *相关物质A标准品 Sulindac Related Compound A 20mg 53933-60-1
38649 舒利苯酮标准品 Sulisobenzone 500mg 4065-45-6
38650 舒马曲坦标准品 Sumatriptan 50mg 103628-46-2
38651 琥珀酸舒马曲坦标准品 Sumatriptan Succinate 200mg 103628-48-4
38652 琥珀酸舒马曲坦相关物质A标准品 15mg
38653 琥珀酸舒马曲坦相关物质C标准品 50mg
38654 琥珀酸舒马曲坦相关杂质标准品 人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒25mg
38655 舒洛芬标准品 Suprofen 200mg 40828-46-4
38656 盐酸他克林标准品 Tacrine Hydrochloride 500mg 1684-40-8
38657 *标准品 Tacrolimus 150mg 109581-93-3
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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