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上海纪宁酶联科技有限公司
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人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
27146 25-羟基-原人参三醇 25-OH-Protopanaxtiol ≥97%
27147 2-O-没食子酰基金丝桃苷 2-O-galloylhyperin ≥98%
27148 2-羟基泽兰内酯 2-Hydroxyeupatolide ≥97%
27149 3’-甲氧基-5’-羟基异黄酮-7- O-β-D-葡萄糖苷 3’-methoxy-5’-hydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucoside 95%
27150 4-羟基-L-异* 4-Hydroxyisoleucine ≥98% ≥97%
27151 4'-去甲基表* 4'-Demethylepipodophyllotoxin ≥95%
27152 5-羟基* 5-HTP ≥98%
27153 6-姜酚 6-Gingerol ≥98%
27154 6-姜烯酚 6-Shogaol
≥95%
27155 7-木糖基-* 7-xylosyltaxol ≥95%
27156 7-乙基-10-羟基* 7-Ethyl-10-Hydroxycamptothecin ≥98%
27157 7-乙基* 7-Ethylcamptothecin ≥98%
27158 8-O-乙酰山栀苷甲酯 8-O-acetylshanzhiside methyl ester 97%
27159 8-甲氧基补骨脂素 8-Methoxypsoralen ≥98%
27160 8-姜酚 8-Gingerol ≥95%
27161 9-氨基* 9-Aminocamptothecin ≥98%
27162 Alpha-* Alpha-asarone ≥98%
27163 Apiosylskimmin Apiosylskimmin ≥98%
27164 Menisdaurin Menisdaurin ≥98%
27165 Rosiridin Rosiridin ≥95%
27166 α-倒捻子素 α-Mangostin ≥98%
27167 β- 蜕皮甾酮 β-Ecdysone ≥99%
27168 β-倒捻子素 β-Mangostin ≥98%
27169 γ-日蟾毒配质 γ-Bufotalin ≥98%
27170 阿马碱 Ajmalicine ≥98%
27171 安格洛苷C Angoroside C ≥98%
27172 安石榴苷 Punicalagin ≥97%
27173 安五脂素 Anwuligan ≥98%
27174 巴卡丁III Baccatin III ≥98%
27175 白花丹醌(白花丹素) plumbapin 95%
27176 表没食子儿茶素(EGC) Epigallocatechin ≥98%
27177 白花前胡丙素 Praeruptorin C ≥98%
27178 白花前胡丁素 Praeruptorin D ≥98%
27179 白花前胡素E Praeruptorin E ≥98%
27180 白桦脂酸 Betulinic acid ≥98%
27181 白屈菜碱 Chelidonine ≥98%
27182 白术内酯 III Atractylenolide III ≥98%
27183 白术内酯Ⅰ Atractylenolide I ≥98%
27184 白头翁素 ANEMONIN ≥98%
27185 白鲜碱 Dictamnine ≥98%
27186 斑蝥素 Cantharidin ≥98%
27187 贝萼皂苷元 Bayogenin ≥98%
27188 扁塑藤素 Pristimerin ≥98%
27189 扁蓄苷 Quercetin 3-O-alpha-L-arabinoside ≥98%
27190 表儿茶素没食子酸酯 Epicatechin gallate ≥98%
27191 表没食子儿茶素没食子酸酯 EGCG ≥98%
27192 槟榔碱 Arecoline hydrobromide ≥98%
27193 补骨脂甲素 , 补骨脂二氢黄酮 Bavachin 97%
27194 补骨脂乙素,异补骨脂查尔酮 Isobavachalcone 97%
27195 苍术苷A atractyloside A ≥97%
27196 苍术素人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒 Atractylodin ≥97%
27197 藏红花酸 Alpha-Crocetin ≥95%
27198 岑酮 Fraxinellone ≥98%
27199 柴胡皂苷C Saikosaponin C ≥97%
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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