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上海纪宁酶联科技有限公司
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人胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
人胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在人胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
21842 * 对照品 含量测定(UV) 100495-200501 100mg
21843 对氯* 对照品 供检查用 100498-200301 50mg
21844 * 对照品 HPLC法含量测定 100502-200401 50mg
21845 * 对照品 含量测定用 100503-200301 200mg
21846 * 对照品 检查(HPLC) 100504-200501 50mg
21847 * 对照品 含量测定用 100506-200301 100mg
21848 * 对照品 GC法含量测定 100508-200301 50mg
21849 * 对照品 含量测定 100509-200401 50mg
21850 *杂质A 对照品 有关物质检查(HPLC) 100512-200401 50mg
21851 * 对照品 HPLC含量测定 100514-200301 100mg
21852 盐酸* 对照品 IR法鉴别 100518-200401 100mg
21853 异丙* 对照品 含量测定用 100525-200301 200mg
21854 羟* 对照品 HPLC法含量测定 100526-200301 50mg
21855 * 对照品 UV法含量测定 100527-200401 50mg
21856 * 对照品 HPLC法含量测定 100528-200401 50mg
21857 * 对照品 含量测定(HPLC) 100530-200501 50mg
21858 * 对照品 鉴别(TLC) 100531-200501 100mg
21859 * 对照品 HPLC法含量测定 100532-200301 50mg
21860 * 对照品 TLC法鉴别用 100533-200301 100mg
21861 * 对照品 含量测定 100539-200301 100mg
21862 * 对照品 滴定法含量测定 100542-200301 50mg
21863 盐酸* 对照品 HPLC法溶出度检查 100543-200401 100mg
21864 * 对照品 HPLC法含量测定 100544-200501 100mg
21865 苯磺酸* 对照品 供含量测定用 100546-200301 100mg
21866 高乌甲素 对照品 鉴别 100547-200401 50mg
21867 甲磺酸* 对照品 HPLC法含量测定 100548-200501 100mg
21868 * 对照品 含量测定(HPLC) 100551-200501 100mg
21869 * 对照品 含量测定(UV) 100555-200501 100mg
21870 * 对照品 UV法含量测定 100557-200401 100mg
21871 * 对照品 含量测定用 100558-200301 50mg
21872 * 对照品 含量测定用 100559-200301 50mg
21873 * 对照品 供含量测定用 100560-200301 50mg
21874 * 对照品 UV法含量测定 100561-200401 100mg
21875 * 对照品 UV法含量测定用 100563-200301 50mg
21876 * 对照品 TLC法鉴别 100564-200301 50mg
21877 * 对照品 HPLC法含量测定 100566-200401 100mg
21878 昔美酸沙美特罗 对照品 含量测定(HPLC) 100567-200501 50mg
21879 盐酸喹那普利 对照品 HPLC法含量测定 100568-200401 100mg
21880 * 对照品 HPLC法含量测定 100570-200401 100mg
21881 依立雄胺(*) 对照品 UV法含量测定 100572-200401 50mg
21882 * 对照品 UV法溶出度检查 100573-200401 100mg
21883 * 对照品 HPLC法含量测定 100574-200401 100mg
21884 *钠 对照品 含量测定用 100575-200301 100mg
21885 异烟肼 对照品 供含量测定用 100578-200401 50mg
21886 * 对照品 UV法含量测定 100579-200401 100mg
21887 * 对照品 HPLC法含量测定 100580-200501 100mg
21888 * 对照品 含量测定(HPLC) 100581-200501 100mg
21889 * 对照品 UV法含量测定 100583-200401 50mg
21890 * 对照品 HPLC法含量测定 100584-200401 100mg
21891 * 对照品 UV法含量测定 100585-200501 100mg
21892 * 对照品 HPLC法含量测定 100586-200401 100mg
21893 * 对照品 含量测定(HPLC) 100588-200501 100mg
21894 * 对照品 UV法含量测定 100589- 100mg
21895 *钙 对照品 含量测定 100590-200501 50mg
21896 * 对照品 含量测定 100591-200501 100mg
21897 氯波必利 对照品 UV法含量测定 100592-200401 50mg
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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