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上海纪宁酶联科技有限公司
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人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
21411 槐角碱 HPLC≥98% 20mg/支
21412 胡芦巴碱 trigonelline HPLC≥98% 20mg/支
21413 *(祖师麻甲素) Daphnetin HPLC≥98% 20mg/支
21414 小白菊内酯 parthenolide HPLC≥98% 20mg/支
21415 Polyphyllin A HPLC≥98% 20mg/支
21416 重楼皂甙B Polyphyllin B HPLC≥98% 20mg/支
21417 重楼皂甙C Polyphyllin C HPLC≥98% 20mg/支
21418 重楼皂甙E Polyphyllin E HPLC≥98% 20mg/支
21419 重楼皂甙F Polyphyllin F HPLC≥98% 20mg/支
21420 乌金甙 HPLC≥98% 20mg/支
21421 獐牙菜甙 HPLC≥98% 20mg/支
21422 豆腐果甙 Helicid HPLC≥98% 20mg/支
21423 * Huperzine-A HPLC≥98% 20mg/支
21424 川陈皮素 Nobiletin HPLC≥98% 20mg/支
21425 告达亭甙元 HPLC≥98% 20mg/支
21426 青阳参甙元A HPLC≥98% 20mg/支
21427 青阳参甙元B HPLC≥98% 20mg/支
21428 重楼皂苷D Polyphyllin D HPLC≥98% 20mg/支
21429 圣草素-7-0-葡萄糖甙 HPLC≥98% 20mg/支
21430 圣草次苷 Eriocitrin HPLC≥98% 20mg/支
21431 圣草酚 Eriodictyol HPLC≥98% 20mg/支
21432 * Bulleyaconitine A HPLC≥98% 20mg/支
21433 L-4-羟基异* L-4-Hydroxyisoleucine HPLC≥98% 20mg/支
21434
21435 亚麻木酚素(SDG) Secoisolariciresinol Diglucoside HPLC≥98% 20mg/支
21436 α-倒捻子素 α-mangostin HPLC≥98% 20mg/支
21437 β-倒捻子素 β-mangostin HPLC≥98% 20mg/支
21438 3-异倒捻子素 3-isomangostin HPLC≥98% 20mg/支
21439 菊苣酸 Cichoric Acid HPLC≥98% 20mg/支
21440 梭砂贝母碱 HPLC≥98% 10mg/支
21441 地肤子皂苷Ic Momordin Ic HPLC≥98% 20mg/支
21442 大蓟苷(柳穿鱼叶苷) Pectolinarin HPLC≥98% 20mg/支
21443 2"-O-没食子酰基金丝桃苷 2"-O-galloylhyperin HPLC≥98% 20mg/支
21444 9-甲氧基* 9-methoxycamptothecine HPLC≥98% 20mg/支
21445 盐酸石蒜碱 Lycorine chloride HPLC≥98% 20mg/支
21446 光甘草定 Glabridin HPLC≥98% 20mg/支
21447 橙黄决明素 aurantio-obtusin HPLC≥98% 20mg/支
21448 荷叶碱 Nuciferine HPLC≥98% 20mg/支
21449 鹰嘴豆芽素A Biochanin A HPLC≥99% 20mg/支
21450 10-羟基* 10-hydroxycamptothecin HPLC≥99% 20mg/支
21451 * Theobromine ≥99% 20mg/支
21452 D-* D-Pinitol 95% 20mg/支
21453 常春藤皂苷元 Hederagenin HPLC≥98% 20mg/支
21454 花椒毒素 8-Methoxypsoralen HPLC≥98% 20mg/支
21455 白花前胡醇 Peucedanol HPLC≥98% 20mg/支
21456 佛手柑内酯,香柑内酯,5-甲氧基补骨脂素
5-Methoxypsoralen ≥99% 人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒20mg/支
21457 肉碱 L-Carnitine inner salt 98% 20mg/支
21458 矢车菊素-3-0-葡糖糖苷 cyanidin-3-O-glucoside HPLC≥98% 10mg/支
21459 氯化矢车菊素 Cyanidin Chloride HPLC≥94% 10mg/支
21460 5-羟色胺酸(5-HTP) 5-HTP HPLC≥98% 20mg/支
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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