鱼类主要组织相容性复合体（MHC）ELISA试剂盒

鱼类主要组织相容性复合体（MHC）ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法：
1)目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照；与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。
3)以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性；P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑；P／N小于1．5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在鱼类主要组织相容性复合体（MHC）ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给客户带来一些启发，提高试验质量。

11776 膜联蛋白A5(ANXA5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5) 48T/96T Chicken (Gallus)
11777 膜联蛋白A5(ANXA5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11778 载脂蛋白C1(APOC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11779 载脂蛋白C1(APOC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11780 载脂蛋白C1(APOC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11781 线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11782 线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A) 48T/96T Chicken (Gallus)
11783 线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Creatine Kinase, Mitochondrial 1A (CKMT1A) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11784 转铁蛋白受体2(TFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transferrin Receptor 2 (TFR2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11785 转铁蛋白受体2(TFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transferrin Receptor 2 (TFR2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11786 白介素6(IL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11787 白介素6(IL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11788 白介素6(IL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 6 (IL6) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11789 抗脑组织抗体(ABAb)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Brain Tissue Antibody (ABAb) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11790 白介素8(IL8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11791 白介素8(IL8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11792 白介素8(IL8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11793 白介素9(IL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 9 (IL9) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11794 *(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti Mullerian Hormone (AMH) 48T/96T Chicken (Gallus)
11795 *(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti Mullerian Hormone (AMH) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11796 瘦素受体(LEPR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leptin Receptor (LEPR) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11797 白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11798 白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11799 白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11800 白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leukemia Inhibitory Factor (LIF) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11801 瘦素(LEP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11802 瘦素(LEP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11803 瘦素(LEP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11804 L选择素(SELL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Selectin, Leukocyte (SELL) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11805 单核细胞趋化蛋白2(MCP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11806 单核细胞趋化蛋白2(MCP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11807 单核细胞趋化蛋白2(MCP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11808 单核细胞趋化蛋白2(MCP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 2 (MCP2) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11809 巨噬细胞来源趋化因子(MDC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Macrophage Derived Chemokine (MDC) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11810 抗平滑肌抗体(ASMA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Smooth Muscle Antibody (ASMA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11811 组织蛋白酶K(CTSK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11812 组织蛋白酶K(CTSK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11813 组织蛋白酶K(CTSK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11814 组织蛋白酶K(CTSK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Chicken (Gallus)
11815 组织蛋白酶K(CTSK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cathepsin K (CTSK) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)

下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法：
1 选择试剂：选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样：可能原因： 
1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 
2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法： 
1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒*混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 
2) 加样后及时放入孵箱。 
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 
5) 标本较多时，请分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*； 
2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。解决办法： 
1) 贴封片或加盖； 
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 
2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。 
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 
1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 
2) 合理安排，或多用几台洗板机。
5显色：可能原因： 
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 
1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； 
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止：可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板：如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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