仓鼠组织蛋白酶K（cath-K）ELISA试剂盒

仓鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法：
1)目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照；与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。
3)以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性；P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑；P／N小于1．5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在仓鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给客户带来一些启发，提高试验质量。

11144 载脂蛋白A4(APOA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein A4 (APOA4) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11145 载脂蛋白D(APOD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein D (APOD) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11146 补体成分5(C5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Complement Component 5 (C5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11147 血小板反应蛋白解整合素金属肽酶1(ADAMTS1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 1 (ADAMTS1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11148 补体成分8γ(C8γ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Complement Component 8g (C8g) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11149 血小板反应蛋白解整合素金属肽酶7(ADAMTS7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 7 (ADAMTS7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11150 蛋白S(PROS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein S (PROS) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11151 色素上皮衍生因子(PEDF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Pigment Epithelium Derived Factor (PEDF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11152 表面活性物质关联蛋白B(SPB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Surfactant Associated Protein B (SPB) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11153 表面活性物质关联蛋白C(SPC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Surfactant Associated Protein C (SPC) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11154 瘦素(LEP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leptin (LEP) 48T/96T Chicken (Gallus)
11155 基质金属蛋白酶28(MMP28)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 28 (MMP28) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11156 肌腱蛋白C(TNC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Tenascin C (TNC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11157 肌腱蛋白C(TNC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Tenascin C (TNC) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11158 *ⅩⅢB肽(F13B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Coagulation Factor XIII B Polypeptide (F13B) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11159 膜联蛋白A2(ANXA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Annexin A2 (ANXA2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11160 膜联蛋白A2(ANXA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Annexin A2 (ANXA2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11161 羧甲基赖氨酸(CML)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Carboxymethyl Lysine (CML) 48T/96T General
11162 铁调素(Hepc)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hepcidin (Hepc) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11163 白介素33(IL33)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 33 (IL33) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11164 内皮素受体A(ETRA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Endothelin Receptor A (ETRA) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11165 内皮素受体B(ETRB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Endothelin Receptor B (ETRB) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11166 微管关联蛋白τ(MAPτ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Microtubule Associated Protein Tau (MAPt) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11167 τ-蛋白激酶1(τPK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Tau-Protein Kinase 1 (tPK1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11168 强啡肽(Dyn)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Big Dynorphin (Dyn) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11169 甘露糖结合蛋白(MBL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Mannose Binding Lectin (MBL) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11170 甘露聚糖结合凝集素关联*蛋白酶1(MASP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Mannose Associated Serine Protease 1 (MASP1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11171 甘露聚糖结合凝集素关联*蛋白酶1(MASP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Mannose Associated Serine Protease 1 (MASP1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11172 上皮型脂肪酸结合蛋白(FABP5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal (FABP5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11173 凋亡相关因子配体(FASL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11174 血红素结合蛋白(HPX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hemopexin (HPX) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11175 蛋白激酶N2(PKN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase N2 (PKN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11176 蛋白激酶N2(PKN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase N2 (PKN2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11177 蛋白激酶N2(PKN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase N2 (PKN2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11178 CD3d分子(CD3d)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 3d (CD3d) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11179 Toll样受体1(TLR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Toll Like Receptor 1 (TLR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11180 Toll样受体3(TLR3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Toll Like Receptor 3 (TLR3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11181 骨形成蛋白1(BMP1)仓鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 1 (BMP1) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11182 Toll样受体5(TLR5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Toll Like Receptor 5 (TLR5) 48T/96T Homo sapiens (Human)

下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法：
1 选择试剂：选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样：可能原因： 
1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 
2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法： 
1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒*混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 
2) 加样后及时放入孵箱。 
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 
5) 标本较多时，请分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*； 
2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。解决办法： 
1) 贴封片或加盖； 
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 
2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。 
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 
1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 
2) 合理安排，或多用几台洗板机。
5仓鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒显色：可能原因： 
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 
1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； 
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止：可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板：如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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