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上海纪宁酶联科技有限公司
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兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
6718 人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA Kit,48T/96T
6719 小鼠β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)ELISA Kit,48T/96T
6720 大鼠金属硫蛋白(MT)ELISA Kit,48T/96T
6721 小鼠*(LZM)ELISA Kit,48T/96T
6722 犬*结合蛋白(RBP)ELISA Kit,48T/96T
6723 大鼠*结合蛋白(RBP)ELISA Kit,48T/96T
6724 大鼠心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA Kit,48T/96T
6725 兔心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA Kit,48T/96T
6726 大鼠乳酸脱氢酶(LDH) ELISA Kit,48T/96T
6727 大鼠乙酰*酯酶(AChE)ELISA Kit,48T/96T
6728 鸡脂多糖/内毒素(LPS)ELISA Kit,48T/96T
6729 犬*α1(Thymosin α1)ELISA Kit,48T/96T
6730 人大肠癌专一抗原4(CCSA-4)ELISA Kit,48T/96T
6731 人大肠癌专一抗原3(CCSA-3)ELISA Kit,48T/96T
6732 人胰岛素样生长因子2受体(IGF-2R)ELISA Kit,48T/96T
6733 人组织内转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)ELISA Kit,48T/96T
6734 人血管紧张素Ⅰ转化酶(ACEⅠ)ELISA Kit,48T/96T
6735 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3
6736 人心肌锚蛋白重复域1(ANKRD1)ELISA Kit,48T/96T
6737 人α肌动蛋白(α Actin)ELISA Kit,48T/96T
6738 人葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)ELISA Kit,48T/96T
6739 人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)ELISA Kit,48T/96T
6740 人转化生长因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA Kit,48T/96T
6741 人同源框B2(HOXB2)ELISA Kit,48T/96T
6742 人皮肤蛋白(DPT)ELISA Kit,48T/96T
6743 人前列腺素D合成酶(PTGDS)ELISA Kit,48T/96T
6744 人蛋白磷酸酶1调控/抑制因子亚基1A(PPP1R1A)
6745 人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)ELISA Kit,48T/96T
6746 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4
6747 人磷酸甘油酸变位酶2(PGAM2)ELISA Kit,48T/96T
6748 人黑素瘤衍生*拉链额外核因子(MLZE)ELISA Kit,48T/96T
6749 人CC趋化因子受体7(CCR-7)ELISA Kit,48T/96T
6750 人TU3A蛋白(TU3A)ELISA Kit,48T/96T
6751 人大肠癌专一抗原2(CCSA-2)ELISA Kit,48T/96T
6752 猴B病毒(BV)ELISA Kit,48T/96T
6753 人肌抑素(MSTN)ELISA Kit,48T/96T
6754 人可溶性CD44变体9(sCD44-v9)ELISA Kit,48T/96T
6755 大肠杆菌宿主残留蛋白检测试剂盒(E.coli P)ELISA Kit,48T/96T
6756 人高尔基蛋白73(GP-73)ELISA Kit,48T/96T
6757 大鼠孕酮受体(PROGR)ELISA Kit,48T/96T
6758 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体(GM-CSF Ab)
6759 人血浆抗凝蛋白C(PC) ELISA Kit,48T/96T
6760 人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA Kit,48T/96T
6761 罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)ELISA Kit,48T/96T
6762 红螯光壳螯虾卵黄脂磷蛋白(Lv/Vn)ELISA Kit,48T/96T
6763 鱼卵黄高磷蛋白(PV)ELISA Kit,48T/96T
6764 鸡蛋卵黄高磷蛋白磷酸肽(PPP)ELISA Kit,48T/96T
6765 家蚕卵黄蛋白(LT)ELISA Kit,兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒48T/96T
6766 鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)ELISA Kit,48T/96T
6767 α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA Kit,48T/96T
6768 人细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)ELISA Kit,48T/96T
6769 人整合素αM型(ITG αM/CD11b) ELISA Kit,48T/96T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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