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上海纪宁酶联科技有限公司
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兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
6601 人*蛋白酶(PRSS)ELISA Kit,48T/96T
6602 人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA Kit,48T/96T
6603 人血清淀粉样蛋白P(SAP)ELISA Kit,48T/96T
6604 人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA Kit,48T/96T
6605 人抗糖脂抗体(glycolipid)ELISA Kit,48T/96T
6606 人甘露糖受体(MR)ELISA Kit,48T/96T
6607 人甘露糖(Mannose)ELISA Kit,48T/96T
6608 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA Kit,48T/96T
6609 人肽聚糖(PG)ELISA Kit,48T/96T
6610 人协同刺激分子受体(CMR)ELISA Kit,48T/96T
6611 人吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)ELISA Kit,48T/96T
6612 人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA Kit,48T/96T
6613 人脱氧尿三磷酸(DUTP)ELISA Kit,48T/96T
6614 人重组激活基因1(RAG-1)ELISA Kit,48T/96T
6615 人重组激活基因2(RAG-2)ELISA Kit,48T/96T
6616 人DNA结合蛋白(DBP)ELISA Kit,48T/96T
6617 人八聚体转录因子(OTF2A)ELISA Kit,48T/96T
6618 人八聚体转录因子(OTF2B)ELISA Kit,48T/96T
6619 人胸腺白血病抗原(TLa)ELISA Kit,48T/96T
6620 人潜伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA Kit,48T/96T
6621 人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISA Kit,48T/96T
6622 人细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISA Kit,48T/96T
6623 人淋巴毒素α(LTA)ELISA Kit,48T/96T
6624 人淋巴毒素β(LTB)ELISA Kit,48T/96T
6625 人类白细胞抗原A(HLA-A)ELISA Kit,48T/96T
6626 人类白细胞抗原E(HLA-E)ELISA Kit,48T/96T
6627 人类白细胞抗原C(HLA-C)ELISA Kit,48T/96T
6628 人干扰素调节因子(IRF)ELISA Kit,48T/96T
6629 人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA Kit,48T/96T
6630 人锚蛋白(ankyrin)ELISA Kit,48T/96T
6631 人通用转录复合体(GTC)ELISA Kit,48T/96T
6632 人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA Kit,48T/96T
6633 人ω干扰素(IFN-ω)ELISA Kit,48T/96T
6634 人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA Kit,48T/96T
6635 人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)ELISA Kit,48T/96T
6636 人淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1/CD11a+CD18)ELISA Kit,48T/96T
6637 人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA Kit,48T/96T
6638 人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA Kit,48T/96T
6639 人二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)ELISA Kit,48T/96T
6640 人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2/CD2)ELISA Kit,48T/96T
6641 人鸟苷酸交换因子(GEF)ELISA Kit,48T/96T
6642 *G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA Kit,48T/96T
6643 *G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA Kit,48T/96T
6644 *G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA Kit,48T/96T
6645 *E Fc段受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA Kit,48T/96T
6646 *E Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA Kit,48T/96T
6647 *A Fc段受体Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA Kit,48T/96T
6648 人巨噬细胞活化因子(MAF)ELISA Kit,48T/96T
6649 人T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA Kit,兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒48T/96T
6650 人β2整合素(integrin β2/CD11+CD18)ELISA Kit,48T/96T
6651 人整合素连接激酶1(ILK-1)ELISA Kit,48T/96T
6652 人衔接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA Kit,48T/96T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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