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上海纪宁酶联科技有限公司
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兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
5327 大鼠绒毛膜*β(β-CG)ELISA Kit,48T/96T
5328 人绒毛膜*(HCG)ELISA Kit,48T/96T
5329 小鼠绒毛膜*(CG)ELISA Kit,48T/96T
5330 大鼠绒毛膜*(CG)ELISA Kit,48T/96T
5331 人抑制素(INH)ELISA Kit,48T/96T
5332 人C肽(C-Peptide)ELISA Kit,48T/96T
5333 小鼠C肽(C-Peptide)ELISA Kit,48T/96T
5334 大鼠C肽(C-Peptide)ELISA Kit,48T/96T
5335 人胰岛素(INS)ELISA Kit,48T/96T
5336 小鼠胰岛素(INS)ELISA Kit,48T/96T
5337 猴胰岛素(INS)ELISA Kit,48T/96T
5338 猪胰岛素(INS)ELISA Kit,48T/96T
5339 大鼠胰岛素(INS)ELISA Kit,48T/96T
5340 兔子胰岛素(INS)ELISA Kit,48T/96T
5341 人新生甲状腺素(NN-T4)ELISA Kit,48T/96T
5342 小鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA Kit,48T/96T
5343 大鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA Kit,48T/96T
5344 人游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA Kit,48T/96T
5345 小鼠游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA Kit,48T/96T
5346 大鼠游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA Kit,48T/96T
5347 人游离甲状腺素(FT4)ELISA Kit,48T/96T
5348 小鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA Kit,48T/96T
5349 大鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA Kit,48T/96T
5350 犬甲状腺素(T4)ELISA Kit,48T/96T
5351 鱼类甲状腺素(T4)ELISA Kit,48T/96T
5352 人甲状腺素(T4)ELISA Kit,48T/96T
5353 小鼠甲状腺素(T4)ELISA Kit,48T/96T
5354 大鼠甲状腺素(T4)ELISA Kit,48T/96T
5355 兔子甲状腺素(T4)ELISA Kit,48T/96T
5356 犬三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA Kit,48T/96T
5357 鱼类三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA Kit,48T/96T
5358 人三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA Kit,48T/96T
5359 小鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA Kit,48T/96T
5360 大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA Kit,48T/96T
5361 人17羟孕酮(17-OHP)ELISA Kit,48T/96T
5362 小鼠17羟孕酮(17-OHP)ELISA Kit,48T/96T
5363 大鼠17羟孕酮(17-OHP)ELISA Kit,48T/96T
5364 人雌三醇(E3)ELISA Kit,48T/96T
5365 小鼠雌三醇(E3)ELISA Kit,48T/96T
5366 大鼠雌三醇(E3)ELISA Kit,48T/96T
5367 人雄烯二酮(ASD)ELISA Kit,48T/96T
5368 小鼠雄烯二酮(ASD)ELISA Kit,48T/96T
5369 大鼠雄烯二酮(ASD)ELISA Kit,48T/96T
5370 人游离睾酮(F-TESTO)ELISA Kit,48T/96T
5371 小鼠游离睾酮(F-TESTO)ELISA Kit,48T/96T
5372 大鼠游离睾酮(F-TESTO)ELISA Kit,48T/96T
5373 犬睾酮(T)ELISA Kit,48T/96T
5374 人睾酮(T)ELISA Kit,48T/96T
5375 小鼠睾酮(T)ELISA Kit,48T/96T
5376 猪睾酮(T)ELISA Kit,兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒48T/96T
5377 大鼠睾酮(T)ELISA Kit,48T/96T
5378 兔子睾酮(T)ELISA Kit,48T/96T
5379 牛孕激素/孕酮(PROG)ELISA Kit,48T/96T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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