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上海纪宁酶联科技有限公司
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兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
01055 人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA试剂盒 human dihydropyrimidinase-like 3,DPYSL3 ELISA Kit 96T/48T
01056 人色氨酰tRNA合成酶(WARS)ELISA试剂盒 human tryptophanyl-tRNA synthetase,WARS ELISA Kit 96T/48T
01057 人己糖激酶3(HK3)ELISA试剂盒 human hexokinase 3,HK3 ELISA Kit 96T/48T
01058 人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒 human phosphofructokinase-plaet,PFKP ELISA Kit 96T/48T
01059 人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒 human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase ELISA Kit 96T/48T
01060 人凋亡相关半*肽酶4(Casp4)ELISA试剂盒 human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISA Kit 96T/48T
01061 人吡哆醛/吡哆醇*6激酶(PDXK)ELISA试剂盒 human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISA Kit 96T/48T
01062 人二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)ELISA试剂盒 human dihydropyrimidinase-like 2,DPYSL2 ELISA Kit 96T/48T
01063 人血清/糖皮质激素调节激酶2(GSK2)ELISA试剂盒 human serum/glucocorticoid regulated kinase 2,GSK2 ISA KIT 96T/48T
01064 人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒 human mitogen activated protein kinase kinase 6,MKK6 ELISA Kit 96T/48T
01065 人吡哆醛/吡哆醇*6磷酸酶(PDXP)ELISA试剂盒 human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase,PDXP ELISA Kit 96T/48T
01066 人T细胞特异性鸟苷三磷酸酶(Tgtp)ELISA试剂盒 Human T-cell specific GTPase,Tgtp ELISA Kit 96T/48T
01067 人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)ELISA试剂盒 Human farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1 ELISA Kit 96T/48T
01068 人D-乳酸脱氢酶(D-LDH) ELISA试剂盒 Human D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA Kit 96T/48T
01069 人α1抗*(α1-AT)ELISA试剂盒 Human α1-Antitrypsin,α1-AT ELISA Kit 96T/48T
01070 人*1(KLK 1)ELISA试剂盒 Human Kallikrein 1,KLK 1 ELISA Kit 96T/48T
01071 人磷酸化乙酰*(PaCoA)ELISA试剂盒 Human Phosphorylated acetyl CoA,PaCoA ELISA Kit 96T/48T
01072 人磷酸甘油酸变位酶2(PGAM2)ELISA试剂盒 Human phosphoglycerate mutase 2,PGAM2 ELISA Kit 96T/48T
01073 人前列腺素D合成酶(PTGDS)ELISA试剂盒 Human Prostaglandin D synthase,PTGDS ELISA Kit 96T/48T
01074 人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)ELISA试剂盒 Human peptidylprolyl isomerase(cyclophilin)-like 1,PPIL1 ELISA Kit 96T/48T
01075 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)ELISA试剂盒 Human mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 3,MAPKAPK3 ELISA Kit 96T/48T
01076 人血管紧张素Ⅰ转化酶(ACEⅠ)ELISA试剂盒 Human Angiotensin Ⅰ Converting Enzyme,ACEⅠ ELISA Kit 96T/48T
01077 人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA试剂盒 Human Caspase 12,Casp-12 ELISA Kit 96T/48T
01078 人蛋白激酶A(PKA)ELISA试剂盒 Human Protein kinase A,PKA ELISA Kit 96T/48T
01079 人解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)ELISA试剂盒 Human A Disintegrin And Metalloprotease 10,ADAM10 ELISA Kit 96T/48T
01080 人胸苷酸合成酶(TS)ELISA试剂盒 Human thymidylate synthetase,TS ELISA Kit 96T/48T
01081 人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)ELISA试剂盒 Human thymidinephosphorylase,TP ELISA Kit 96T/48T
01082 人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA试剂盒 Human Poly ADP ribose polymerase,PARP ELISA Kit 96T/48T
01083 人葡萄糖激酶(GCK)ELISA试剂盒 Human glucokinase,GCK ELISA Kit 96T/48T
01084 人单胺氧化酶(MAO)ELISA试剂盒 Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit 96T/48T
01085 人胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA试剂盒 Human cytosolic phospholipase A2,cPLA2 ELISA Kit 96T/48T
01086 人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒 Human diamine oxidase,DAO ELISA Kit 96T/48T
01087 人环加氧酶2(COX-2)ELISA试剂盒 Human cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit 96T/48T
01088 人周期素依赖性激酶5(CDK5)ELISA试剂盒 Human Cyclin Dependent Kinase 5,CDK5 ELISA Kit 96T/48T
01089 人*10(KLK 10)ELISA试剂盒 Human Kallikrein 10,KLK 10 ELISA Kit 96T/48T
01090 人磷酯酶Cγ链(PLCγ1)ELISA试剂盒 Human Phospholipase Cγ1,PLCγ1 ELISA Kit 96T/48T
01091 人神经氨酸酶(NA)ELISA试剂盒 Human neuraminidase,NA ELISA Kit 96T/48T
01092 人磷酯酰肌醇特异性磷酯酶C(PIPLC)ELISA试剂盒 Human phosphoinositide-specific phospholipase C,PIPLC ELISA Kit 96T/48T
01093 人*激酶2(Tyk-2)ELISA试剂盒 Human tyrosine kinase2,Tyk-2 ELISA Kit 96T/48T
01094 人白介素1β转换酶(ICE)ELISA试剂盒 Human Interleukin 1β converting enzyme,ICE ELISA Kit 96T/48T
01095 人整合素连接激酶1(ILK-1)ELISA试剂盒 Human integrin-linked kinase 1,ILK-1 ELISA Kit 96T/48T
01096 人细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISA试剂盒 Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase,CYP21B ELISA Kit 96T/48T
01097 人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISA试剂盒 Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase,CYP21A ELISA Kit 96T/48T
01098 人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA试剂盒 Human terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT ELISA Kit 96T/48T
01099 人吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)ELISA试剂盒 Human indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO ELISA Kit 兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)ELISA试剂盒96T/48T
01100 人脾脏*激酶(Syk)ELISA试剂盒 Human spleen tyrosine kinase,Syk ELISA Kit 96T/48T
01101 人*/*蛋白磷酸酶(STK)ELISA试剂盒 Human serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit 96T/48T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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