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上海纪宁酶联科技有限公司
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兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒,ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在酶联免疫实验得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
00370 人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒 Human Elastase ELISA Kit 96T/48T
00371 人白细胞弹性蛋白酶(HLE)ELISA试剂盒 Human leukocyte exastase,HLE ELISA Kit 96T/48T
00372 人α*(AMS/AMY)ELISA试剂盒 Human α-Amylase,AMS/AMY ELISA Kit 96T/48T
00373 人碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒 Human alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit 96T/48T
00374 人胶原酶II(Collagenase II)ELISA试剂盒 Human Collagenase Type II ELISA Kit 96T/48T
00375 人乙酰*酯酶(AChE)ELISA试剂盒 Human Acetylcholinesterase,AChE ELISA Kit 96T/48T
00376 人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA试剂盒 Human glucose oxidase,GOD ELISA Kit 96T/48T
00377 人透明质酸酶(HAase)ELISA试剂盒 Human Hyaluronidase,HAase ELISA Kit 96T/48T
00378 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA试剂盒 Human Acid Phosphatase,ACP ELISA Kit 96T/48T
00379 人β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)ELISA试剂盒 Human β-glucuronidase,βGD ELISA Kit 96T/48T
00380 人β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA试剂盒 Human β-glucosidase ELISA Kit 96T/48T
00381 人β内酰胺酶(β-lactamase)ELISA试剂盒 Human β-lactamase ELISA Kit 96T/48T
00382 人β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA试剂盒 Human α mannosidase,α Manase ELISA Kit 96T/48T
00383 人肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒 Human Creatine Kinase,CK ELISA Kit 96T/48T
00384 人蛋白激酶C(PKC)ELISA试剂盒 Human protein kinase C,PKC ELISA Kit 96T/48T
00385 人醛缩酶(ALD)ELISA试剂盒 Human Aldolase,ALD ELISA Kit 96T/48T
00386 人L-乳酸脱氢酶(L-LDH)ELISA试剂盒 Human L-Lactate Dehydrogenase,L-LDH ELISA Kit 96T/48T
00387 人*8(KLK 8)ELISA试剂盒 Human urokinase-type plasminogen activator,uPA/PLAU ELISA Kit 96T/48T
00388 人*6(KLK 6)ELISA试剂盒 Human Kallikrein 6,KLK 6 ELISA Kit 96T/48T
00389 人*(LZM)ELISA试剂盒 Human Lysozyme,LZM ELISA Kit 96T/48T
00390 人*(PP)ELISA试剂盒 Human Pepsin,PP ELISA Kit 96T/48T
00391 人碳酸酐酶2(CA-2)ELISA试剂盒 Human carbonic anhydrase 2,CA-2 ELISA Kit 96T/48T
00392 人颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒 Human granzymes B,Gzms-B ELISA Kit 96T/48T
00393 人颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒 Human granzymes A,Gzms-A ELISA Kit 96T/48T
00394 人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒 Human tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA Kit 96T/48T
00395 人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒 Human Pyruvate Kinase,M2-PK ELISA Kit 96T/48T
00396 人诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 Human inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA Kit 96T/48T
00397 人磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒 Human Phospholipidase A2,PL-A2 ELISA Kit 96T/48T
00398 人一氧化氮合成酶(NOS)ELISA试剂盒 Human nitric oxide synthase,NOS ELISA Kit 96T/48T
00399 人端粒酶(TE)ELISA试剂盒 Human omerase,TE ELISA Kit 96T/48T
00400 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA试剂盒 Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit 96T/48T
00401 人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA试剂盒 Human Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit 96T/48T
00402 人前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA试剂盒 Human Prostatic Acid Phosphatase,PAP ELISA Kit 96T/48T
00403 人血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒 Human Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit 96T/48T
00404 人尿蛋白(UP)ELISA试剂盒 Human Proteinuria,UP ELISA Kit 96T/48T
00405 人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA试剂盒 Human Aquaporin 2,AQP-2 ELISA Kit 96T/48T
00406 人肌钙蛋白T(Tn-T)ELISA试剂盒 Human Troponin T,Tn-T ELISA Kit 96T/48T
00407 人血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒 Human anti-Endostatin antibody,ES-Ab ELISA Kit 96T/48T
00408 人热休克蛋白27(HSP-27)ELISA试剂盒 Human heat shock protein 27,HSP-27 ELISA Kit 96T/48T
00409 人血管抑素/血管稳定蛋白(ANG)ELISA试剂盒 Human angiostatin,ANG ELISA Kit 96T/48T
00410 人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)ELISA试剂盒 Human heart fatty acid binding protein,h-FABP ELISA Kit 96T/48T
00411 人血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒 Human Bradykinin,BK ELISA Kit 96T/48T
00412 人肌球蛋白轻链(MLC)ELISA试剂盒 Human Myosin light Chain,MLC ELISA Kit 96T/48T
00413 人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)ELISA试剂盒 Human α-Actinin 3,ACTN-3 ELISA Kit 96T/48T
00414 人超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒 Human high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒 96T/48T
00415 人肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒 Human Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA Kit 96T/48T
00416 人血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒 Human Serum amyloid A,SAA ELISA Kit 96T/48T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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