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荧光素标记β淀粉样肽(1-42)抗体IgG

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更新时间:2016-04-17 21:37:58浏览次数:479次

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产品简介

免疫学技术正沿着基础研究-应用研究-高技术开发研究3条主线在开展,上海抚生生物荧光素标记β淀粉样肽(1-42)抗体IgG正推动着技术平台的发展。

详细介绍

荧光素标记β淀粉样肽(1-42)抗体IgG单克隆抗体的免疫抗原,从纯度上说虽不要求很高,但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加,同时可以减轻筛选的工作量。因此,免疫抗原是越纯越好,应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。
荧光素标记
异硫氰酸荧光素(FITC)标记FITC标记抗体的原理是在碱性条件下,FITC 的异硫氰基能与IgG的自由氨基结合,形成IgG与荧光素的结合物。FITC是zui常用的荧光素,其次选用TRITC(四甲基异硫氰酸罗丹明)。FITC和TRITC是常用的双标记组合。荧光素标记β淀粉样肽(1-42)抗体IgG其标记步骤如下:
以碳酸盐缓冲液(PH9.3,Na2CO3 8.6g,NaHCO3 17.3g,蒸馏水1000ml)调整抗体浓度至10mg/ml。
b. 取5ml抗体溶液置于10ml小烧杯中。
c. 称取1mg FITC溶于0.2ml DMSO中,待溶解后立即缓慢滴加于抗体液内,边加边轻搅;其后室温避光作用2小时。
d. 将交联物经Sephadex G25或G50柱层析除去游离的荧光素;分管收集*峰为标记的抗体。
e. FITC的结合物质量鉴定IgG量(mg/ml)=(OD280-OD495×0.35)/1.4F/P=2.87×OD495/(OD280-OD495×0.35),一般说,FITC对抗体的摩尔比为3:1时适合于组织切片染色,为5-6:1时适合于细胞悬液染色。以标记抗体染色各种抗原,测定其特异性染色滴度和非特异染色的程度。
f. 标记抗体的保存:宜保存于4℃,加NaN3防腐。
B、 异硫氰酸罗丹明(TRITC)标记: 基本与FITC标记相同。
荧光素标记β淀粉样肽(1-42)抗体IgG公司产品详情请参阅有关详细论述链接点击:
IASPP(inhibitory member of the ASPP family) ??肿瘤细胞凋亡ASPP家族的另一个成员(抗原)
CD54 ICAM-1 (Intercellular dhesion molecule 1; CD54 antigen;) ??细胞间粘附分子-1(多肽抗原)
IL-1β(Interleukin-1β)??白介素1β(白细胞介素-1β)(多肽抗原)
IL1RAPL1 (Interleukin 1 receptor accessory protein-like 1) ??白介素受体相关蛋白样1前体蛋白(抗原)
IL-6(Interleukin-6)??白介素6(白细胞介素-6)(多肽抗原)
IL-10(Interleukin-10)??白介素10(白细胞介素-10)(抗原)
IL-10(Interleukin-10)??白介素10(白细胞介素-10)(抗原)
IL-8??白介素8(白细胞介素-8)(抗原)
Insulin Receptor(ISR)??胰岛素受体(抗原)
ITG-α(Integrin α chain)??整合素-α(抗原)
LDL-R(Low-density lipoprotein receptor precursor)??低密度脂蛋白受体(抗原)
Ki-67 Antigen??Ki-67 Antigen(抗原)
Kiss-1(Metastasis-suppressor KiSS-1 precursor)??肿瘤转移抑制基因(抗原)
同位素标记
必须强调的是在使用同位素标记单抗或其他蛋白之前,应掌握同位素操作和防护知识。正常情况下应包括避免物理的接触和对γ-射线照射的有效保护,操作和使用同位素标记抗体时,应利用防护装置,并合理处置含放射性的废料。
碘标记用碘标记抗体是一种有效的标记方法。125I衰变产生低能的γ和Χ射线,很容易被检测出来,而其60天的半衰期保证足够的有效使用期,且能很方便地处理放射废料。zui常用的碘标记方法是氯胺T法,即将氧化剂氯胺T加入到抗体和碘化物的溶液中,Na125I在氯胺T作用下I转化成I2,游离I2可与抗体分子中*和一些*发生卤化反应,用还原剂和游离*终止反应,经凝胶过滤将标记的抗体与碘化*及还原剂分离开。其主要操作步骤如下:
a. 在进行标记之前,先选用截流分子量为20000-50000的凝胶,制备1ml凝胶柱,然后分别用10倍体积的1%BSA/PBS/0.02%叠氮钠和PBS洗涤柱体,封住柱下口,备用。
b. 加入10ug纯化单抗至含有25ul 2.5mol/L磷酸钠(PH7.5)的1.5ml指形管内。随后,加入500uCi Na125I混匀。
c. 加入25ul新配制的2mg/ml氯胺T。室温放置60秒。再加入50ul氯胺T终止液(含2.4mg/ml偏重亚硫酸钠,10mg/ml*,10%甘油和0.1%环乙烷酰二甲苯的PBS)。
d. 将上述碘标记物上样在凝胶柱表面,小心放开柱体下口,用1.5ml指形管收集。当碘标记物全部进入柱体,加入0.3ml含0.03%叠氮钠的PBS,用另一指形管收集0.3ml,然后再加0.3ml 0.03% NaN3 PBS,下口收集0.3ml,重复进行,同时用同位素检测仪测定标记与未标记的单抗。标记抗体大约在第二至第四管出现。无害化处理柱子和非单抗标记部分。e. 将标记单抗保存于4℃可使用6周时间。
B、 生物合成法标记将杂交瘤细胞培养在含有放射性前体的培养基中,随着抗体分子的合成、组装,同位素会标记在抗体分子的初级氨基酸链上,本方法不会导致抗体活性的丧失。其主要步骤是:
离心收集处于对数生*的杂交瘤细胞,约需2×106个细胞。以预热37℃不含*的培养基洗涤上述细胞。
b. 用含2% PBS不含*的培养基悬浮杂交瘤细胞至106个/ml,加入35S*(每次加入100uCi可产生105-106cpm的抗体)。
c. 经C02培养箱中培养过夜,离心后,吸出培养上清,分别加入1/20体积的1mol/L Tris(PH8.0)及叠氮钠至浓度0.02%。该标记抗体可按纯化单抗方法进行。荧光素标记β淀粉样肽(1-42)抗体IgG


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