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上海抚生实业有限公司
β淀粉样肽(1-28)抗体经过*实践已经发展的相当成熟,在免疫学诊断中的应用也相当广泛。
β淀粉样肽(1-28)抗体动物体内单抗的方法迄今为止,通常情况下均采用动物体内单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得,因此使用的动物当然*BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内,在小鼠腹腔内生长杂交瘤,并产生腹水,因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。可见该法操作简便、经济,不过,腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白(包括Ig),因此在很多情况下要提纯后才能使用,而且还有污染动物病毒的危险,故而用SPF级小鼠。 β淀粉样肽(1-28)抗体A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液体石蜡。c. 处于对数生*的杂交瘤细胞。
B、方法:a. 腹腔接种降植烷或液体石蜡,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接种用PBS或无血清培养基稀释的杂交瘤细胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 间隔5天后,每天观察小鼠腹水产生情况,如腹部明显膨大,以手触摸时,皮肤有紧张感,即可用16号针头采集腹水,一般可连续采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 将腹水离心(2000r/min 5分钟),除去细胞成分和其他的沉淀物,收集上清,测定抗体效价,分装,-70℃冻存备用,或冻干保存。 β淀粉样肽(1-28)抗体(2) 体外培养单抗的方法总体上讲,杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以进行单层细胞培养,又可以进行悬浮培养。
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Human matrix metalloproteinase 5,MMP-5 人基质金属蛋白酶5(MMP-5)
Human matrix metalloproteinase 4,MMP-4 人基质金属蛋白酶4(MMP-4)
Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)
Human Neuron-specific enolase,NSE 人神经特异性烯醇化酶(NSE)
Human Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB 人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)
Human Prostatic Acid Phosphatase,PAP 人前列腺酸性磷酸酶(PAP)
Human Prostaglandin D Synthase,PGDS 人前列腺素D合成酶(PGDS)
human Pepsinogen C,PG-C 人*原C(PG-C)
human Pepsinogen A,PG-A 人*原A(PG-A)
Human Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR 人*型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)
Human urokinase plasminogen activator,uPA 人*型纤溶酶原激活物(uPA)
Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 人血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域*激酶2(Tie-2)
Human Matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase,MMP-8 人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)
杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室zui常用的手段,即将杂交瘤细胞加入培养瓶中,以含10-15%小牛血清的培养基培养,细胞浓度以1×106-2×106/ml为佳,然后收集培养上清,其中单抗含量约10-50ug/ml。显然,这种方法制备的单抗量极为有限,无疑是不适用于单抗的大规模。要想在体外大量制备单抗,就必须进行杂交瘤细胞的大量(高密度)培养。单位体积内细胞数量越多,细胞存活时间越长,单抗的浓度就越高,产量就越大。 β淀粉样肽(1-28)抗体
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