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上海抚生实业有限公司
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阅读:123发布时间:2018-07-05
上海抚生实业有限公司
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进口ELISA试剂盒价格实验中的封闭液小知识
1、ELISA实验中,蔗糖本身没有封闭作用;
2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保护剂”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加,当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。
实验中背景因素的影响
封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体
非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高,怀疑封闭不
充分,那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。
如果您一直被背景问题所困扰,那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间,但也
是值得的。目前主要有两种类型的封闭液:蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多
个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特
异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
zui常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定,在去除洗涤过程中的一些非特
异结合上很有用。但它们只在存在时起作用,因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添
加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%),它会降低特异结合,产生假阴性。另一
个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液,后者可协助洗涤过程中的封闭。
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