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上海抚生实业有限公司
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阅读:180发布时间:2018-06-20
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ELISA试剂盒价格试验结果产生影响
一、试剂的因素
试剂的准备:在临床实验室,对试剂的准备一般不太注意,通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此,在ELISA测定中试剂的准备为关键的是,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。
试剂的选择:试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。虽然国家采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,但不同的试剂在使用效果上仍存在在差异。要选购度相对高、具有“三证”的试剂,不要用无批号的试剂,选用与仪器配套的试剂。更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。
二、操作中的因素
加样:孵育前加样时间过长,酶试剂加出孔外,使用滴瓶滴加试剂时,滴加的角度不同和挤压的力度不同,致使滴加的试剂量不准,都可导致试验结果不准确。控制方法:①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
温育:温育是ELISA测定为关键、容易出现问题的步骤。为常见的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2-8℃。目前国内售ELISA试剂盒温育时间为37℃,30 min-1 h,进口ELISA试剂盒则通常为37℃,1-2 h能有较*的结合。
温育时间、温度的选择一般根据试剂盒的说明书选择温育的时间、温度。加完样本和(或)试剂后将微孔板从室温放入水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃需要一定时间,如果是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就容易造成实际测定中温育时间不够,易致弱阳性标本测不出来。控制方法:①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察。
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