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ELISA试剂盒价格测定方法有以下几点

阅读:110发布时间:2018-04-13

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ELISA试剂盒价格测定方法有以下几点
2.1  比色法
比色法是以反应生成有色化合物的显色反应为基础,通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法,根据原理不同可分为还原糖法和色原底物法。
2.1.1 还原糖法    这种方法是通过酶作用于化学合成或从自然界提取出来的底物来进行测定的。非淀粉多糖酶与底物在特定的条件(温度、pH值和底物浓度)下反应,反应产物为还原糖,在与显色剂反应后,通过比色确定还原糖的生成量,同时制作标准曲线。酶的活性表示为单位时间产生一定浓度的产物所需要的酶量(mg 或mL)。该法可适用于大部分酶活力的测定,如*、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶等的测定。根据显色剂的不同又可分为DNS 法、钒钼酸铵法和地衣酚法。其中DNS 法由于操作简单、显色稳定,是目前众多实验室和饲料企业在测定非淀粉多糖酶时应用zui多的测定方法。
2.1.2 色原底物法    原理是利用人工合成的含色原基团的底物在酶的作用下释放出有色物质,利用分光光度计比色测定有色物质的含量计算酶活。如木聚糖酶活力的测定。该法操作简单、重现性好,但酶作用于合成底物与天然底物的效果有一定区别,用合成底物测定的酶活并不能代表酶制剂在应用于天然饲料时所能发挥的酶活大小。
2.2  黏度法
这种方法是根据酶能够降低一定浓度的标准底物(控制pH值、温度等条件)的黏度的能力来确定酶的活性。利用的底物主要有化学合成的底物(如CMC 用于纤维素酶的测定) 和自然提取的底物(如小麦阿拉伯木聚糖用于木聚糖酶的测定)。测定的酶的活性值是通过与同时测定的标准酶活性的比较,来确定酶的活性。该法可用于木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶等酶活测定。这种方法的特点是通过降低底物的粘度来反映酶的活性,这也正是酶在体内起作用的重要特征。该法虽然灵敏度较高,但重现性差,操作复杂费时,应用难于普及。
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