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除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 酶 联 免 疫 分 析 （ E L I S A ）
试 剂 盒 使 用 说 明 书
本 试 剂 盒 仅 供 研 究 使 用 。
1 使 用 目 的 ：
本 试 剂 盒 用 于 蔬 菜 、 水 果 、 相 应 食 物 、 水 及 中 毒 残 留 物 中 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 残 留 的 定
量 检 测 。
2 实 验 原 理
本 试 剂 盒 采 用 竞 争 E L I S A 方 法 ， 在 微 孔 板 包 被 有 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 偶 联 抗 原 ， 加 入
除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 标 准 品 或 样 品 ， 游 离 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 与 微 孔 条 上 预 包 被 的 拟 除 虫 菊
酯 ( P y r e t h r o i d s ) 偶 联 抗 原 互 相 竞 争 抗 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 抗 体 酶 标 记 物 ， 用 T M B 底 物 显 色 ，
加 入 终 止 液 后 颜 色 由 蓝 色 变 为 黄 色 ， 用 酶 标 仪 在 4 5 0 n m 波 长 下 进 行 检 测 ， 吸 光 值 与 样 品 中
除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 含 量 成 反 比 ， 通 过 标 准 曲 线 计 算 样 品 中 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 的 含 量 。
3 试 剂 盒 组 成
3 . 1 预 包 被 的 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 偶 联 抗 原 的 可 拆 酶 标 板 ： 1 块 （ 1 2 孔 × 8 条 ） 。
3 . 2 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 标 准 品 ： 6 瓶 （ 1 m l / 瓶 ） ， 含 量 分 别 是 ： 0 n g / m l ,
0 . 0 2 5 n g / m l , 0 . 1 n g / m l , 0 . 2 5 n g / m l , 1 n g / m l , 4 n g / m l 。
3 . 3 抗 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 抗 体 酶 结 合 物 ： 1 瓶 （ 6 m l ） 。
3 . 4 显 色 液 A ： 1 瓶 （ 6 m l ） 。
3 . 5 显 色 液 B ： 1 瓶 （ 6 m l ） 。
3 . 6 终 止 液 ： 1 瓶 （ 6 m l ） ， 2 M 硫 酸 。
3 . 7 样 本 稀 释 液 ： 1 瓶 （ 1 0 × , 6 m l ） ， 用 于 样 品 稀 释 用 。
3 . 8 浓 缩 洗 涤 液 ： 1 瓶 （ 2 0 × ， 2 0 m l ） ， 用 于 洗 板 。
3 . 9 说 明 书 一 份 。
4 需 要 而 未 提 供 的 材 料
4 . 1 设 备
4 . 1 . 1 波 长 4 5 0 n m 酶 标 仪 。
4 . 1 . 2 粉 碎 机 。
4 . 1 . 3 量 筒 。
4 . 1 . 4 振 荡 器 。
4 . 1 . 5 漏 斗 。
4 . 1 . 6 W h a t m a n N o 1 或 相 当 的 滤 纸 。
4 . 1 . 7 微 量 移 液 器 。
4 . 2 试 剂
4 . 2 . 1 去 离 子 水 或 蒸 馏 水 。
4 . 2 . 2 甲 醇 。
5 贮 存
5 . 1 试 剂 盒 贮 存 于 2 ~ 8 ℃ ， 切 勿 冷 冻
5 . 2 未 用 完 的 微 孔 板 应 该 密 封 干 燥 保 存
6 注 意 事 项
6 . 1 使 用 试 剂 盒 前 请 仔 细 阅 读 说 明 书 。
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6 . 2 不 要 使 用 过 期 试 剂 盒 。
6 . 3 试 剂 盒 使 用 前 ， 将 试 剂 恢 复 至 室 温 （ 2 5 ± 2 ℃ ） ， 建 议 至 少 回 温 2 小 时 。
6 . 4 标 准 品 中 含 有 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) ， 使 用 时 应 特 别 注 意 ， 操 作 时 应 带 手 套 。
6 . 5 终 止 液 中 含 有 硫 酸 ， 使 用 时 防 止 灼 伤 皮 肤 及 腐 蚀 衣 物 。
6 . 6 不 同 标 准 品 、 样 品 所 用 吸 头 不 能 混 用 ， 否 则 会 影 响 试 验 结 果 。
6 . 7 不 同 批 号 试 剂 盒 中 的 试 剂 不 得 混 用 ； 不 同 标 准 品 、 样 品 所 用 吸 头 不 得 混 用 ， 否 则 会 影 响
实 验 结 果 。
6 . 8 稀 释 样 本 时 必 须 用 本 试 剂 盒 中 的 样 本 稀 释 液 ， 否 则 会 影 响 实 验 结 果
6 . 9 混 合 试 剂 时 应 避 免 起 泡 。
7 工 作 液 准 备
7 . 1 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 标 准 品 溶 液 ： 0 n g / m l , 0 . 0 2 5 n g / m l , 0 . 1 n g / m l , 0 . 2 5 n g / m l , 1 n g / m l , 4 n g / m l
7 . 2 浓 缩 洗 涤 液 ： 用 蒸 馏 水 按 1 : 2 0 ( 1 + 1 9 ) 稀 释 备 用
7 . 3 样 本 稀 释 液 ： 用 蒸 馏 水 按 1 : 1 0 ( 1 + 9 ) 稀 释 备 用
7 . 3 显 色 剂 ： 已 备 用 ， 避 免 光 线 直 照
7 . 4 反 应 终 止 液 ： 已 备 用
8 样 品 处 理 程 序 （ 样 品 在 提 取 过 程 中 ， 要 严 格 按 说 明 书 操 作 ， 提 取 过 程 中 应 准 确 稀 释 ， 否 则
会 出 现 结 果 不 准 确 ， 样 品 应 当 保 存 在 阴 凉 避 光 之 处 及 冷 藏 保 存 ）
8 . 1 取 1 0 g 粉 碎 的 样 品 ， 加 2 0 m l 7 0 % 甲 醇 溶 液
8 . 2 强 力 振 荡 3 分 钟
8 . 3 用 W h a t m a n N o 1 滤 纸 过 滤
8 . 4 取 2 5 μ l 处 理 后 的 样 品 ， 加 入 2 5 μ l 样 本 稀 释 液 于 反 应 孔 中 （ 样 本 稀 释 倍 数 为 2 ）
9 酶 免 分 析 步 骤
9 . 1 实 验 须 知
9 . 1 . 1 实 验 开 始 前 请 将 所 有 试 剂 于 盒 外 充 分 恢 复 至 室 温 （ 2 5 ± 2 ℃ ） ， 时 间 约 2 小 时 。 回 温 至 室
温 （ 2 5 ± 2 ℃ ） 后 再 取 出 微 孔 条 ， 多 余 的 微 孔 条 重 新 密 封 立 即 于 2 ~ 8 ℃ 干 燥 保 存
注 ： 一 定 保 证 回 温 充 分 ， 否 则 影 响 检 测 的 精 确 度 和 准 确 度 。
9 . 1 . 2 使 用 后 请 立 即 将 试 剂 放 回 2 ~ 8 ℃ 保 存
9 . 1 . 3 请 不 要 改 变 分 析 程 序
9 . 1 . 4 请 使 用 精 确 的 微 量 移 液 器
9 . 1 . 5 操 作 一 旦 开 始 ， 请 不 要 中 断 任 何 程 序
9 . 1 . 6 E L I S A 结 果 的 可 重 复 性 极 大 程 度 的 取 决 于 操 作 程 序 ， 请 严 格 按 照 要 求 操 作
9 . 1 . 7 为 避 免 交 叉 污 染 ， 每 个 标 准 品 和 样 品 均 应 使 用 不 同 的 吸 头 加 样
9 . 1 . 8 加 样 时 请 勿 让 吸 头 接 触 微 孔 中 的 溶 液 或 内 表 面
9 . 2 分 析 步 骤
9 . 2 . 1 预 先 进 行 编 号 ， 标 记 B 0 、 标 准 品 和 样 品 的 位 置 ， 推 荐 进 行 双 孔 检 测
9 . 2 . 2 取 所 需 数 量 的 微 孔 （ 微 孔 条 可 拆 ） ， 将 多 余 板 条 重 新 密 封 并 立 即 放 回 2 ~ 8 ℃ 保 存
9 . 2 . 3 样 品 稀 释 液 （ 1 0 × ） 、 浓 缩 洗 涤 液 （ 2 0 × ） 稀 释 成 工 作 液 ( 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 稀 释 )
9 . 2 . 4 在 B 0 孔 中 加 入 5 0 μ l 0 . 0 n g / m l 标 准 品 溶 液
9 . 2 . 5 在 各 标 准 孔 中 加 入 5 0 μ l 的 标 准 品 溶 液
9 . 2 . 6 在 各 样 品 孔 中 加 入 5 0 μ l 样 品 溶 液
9 . 2 . 7 在 所 有 孔 中 加 入 5 0 μ l 的 抗 除 虫 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 抗 体 酶 结 合 物
9 . 2 . 8 轻 轻 晃 动 反 应 板 几 秒 钟 。
9 . 3 3 7 ℃ 温 浴 3 0 m i n （ 温 浴 过 程 中 不 时 轻 拍 反 应 板 ， 可 以 减 少 双 孔 误 差 ）
9 . 3 . 1 甩 掉 孔 中 液 体 ， 用 洗 液 洗 涤 微 孔 板 5 次 ， zui 后 一 次 应 在 吸 水 纸 上 拍 打 以 完 全 除 去 孔 中 液
