IL—9的检测
IL-9是由T细胞产生，天然IL-9可从TH细胞克隆TUC2．15和TUC7．51细胞的培养上清中获得，人PBMC经PHA、TPA、A23187等物质刺激后也能合成IL-9。
(一)依赖细胞系TSl测定法
TSl细胞是C57BL／6小鼠TH细胞系。来源于TUC2．15克隆。将TUC2．15细胞在TUC2．15细胞条件上清中连续培养，直至使之失去对抗原或饲养细胞的依赖性。TSl只特异地依赖于IL-9生长，需在含IL-9的培养液中传代培养。具体操作步骤是将TSl细胞洗涤后，加入预先加有待测样品的96孔培养板，每孔3×103细胞／100L，常规培养3d后，通过测定氨基己糖酶(hexosaminidase)水平或测定3H-TdR掺人值来判定细胞的增殖。
(二)M—07e细胞测定法
IL-9可刺激人巨幼红细胞性白血病细胞系M-07e细胞的增殖，据此用3H-TdR掺人法可测定IL-9活性，亦可用比色法测定。但IL-3、IL-4、GM-CSF等亦可刺激M-07e细胞增殖，故标本中含有这些细胞因子时，需用相应的中和抗体处理后再测定。M-07e细胞对鼠ID9的敏感性与人IL-9相同，且对鼠源IL-3、IL-4和GM-CSF不发生反应，故用于鼠IL-9测定时更方便。
1．向96孔培养板中加入*RPMI-1640，100t~L／孔，A排1～3孔不加。
2．用含10％NBS的RPMI-10将IL-9标准品稀释至162U／mL，加入A排1—3孔，
150uL／孔。自A排1～3孔各取50／~L加入B排1～3孔，混匀。再自B排1～3孔取50／uL加入C排1—3孔，依次稀释直至C排1～3孔，H排l～3孔不加，留作阴性对照。
3．待测标本加入A排4、12孔，每份标本设3个复孔，同步骤(2)进行系列稀释。
4．自培养瓶中收集M-07e细胞，1 500r／min室温离心，去上清，加5mL*RPMI-1640培养液悬浮细胞，计数，取106个活细胞加入15mL离心管中，加满RPMI—1640液，同前离心以进一步洗去维持培养液中可能残留的IL-3和GM-CSF。
5．调整细胞浓度至105／mL，加入培养板中，100／tL／孔，置5％C02，37％温箱中培养3d后，加3H-TdR继续培养6～8h，收获细胞测定cpm值。
