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上海抚生实业有限公司
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阅读:206发布时间:2018-8-10
进口ELISA试剂盒价格验样本收集及保存恒远生物提几点建议:
1.严重溶血,以HRP为标记的ELISA测定中,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性,催化底物显色造成假阳性;
2.混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净;如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应:
3.标本凝固不全,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;
4.采血试管洗涤不*、反复使用易交叉污染:塑料试管能吸附抗原物质,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
血清标本宜在新鲜时检测,严重溶血标本禁用。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合,使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存;使用一次性玻璃试管或真空管*;并使用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关;EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性;血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的*或于*中加入适当的促凝剂。
被检血清或血浆标本,可用含保护性封阻剂(吐温-20)或称湿润剂的缓冲液来稀释。也可加入一些蛋白质,如1%牛血清白蛋白等来稀释。然后再加到已经用抗原或抗体包被的固相载体中进行孵育。此种被试标本可作一系列稀释度测定,也可用一个稀释度测定。对于作某一个传染病的诊断来说,先用一系列稀释度作一批标本测定,求出对诊断有意义的一个稀释度(即测定剂量反应曲线),然后用一个稀释测定即可。zui适稀释度和孵育时间均需从实践中摸索出来,对一般病原微生物所引起的传染病的血清学诊断,以1:200稀释度测定比较适当,而试验标本的(即含抗体)作用时间一般为室温或37℃ 1-2小时。但现在对有些标本(如流脑抗原)测定时,仅用37℃ 5分钟。对单克隆抗体检测也可缩短作用时间。
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