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包被条件与ELISA试剂盒的影响

阅读：263发布时间：2015-3-6

1.ELISA包被抗原的选择
包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类.天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化).ELISA试剂盒经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上.

2.包被液的选择
一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液.

3.包被温度的选择
通常是4-8度条件下或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持.

4.包被浓度的选择
包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的zui适包被浓度需要通过实验来确定.

包板后需要封闭吗？应该选择什么样的封闭体系？
封闭是否必要,取决于ELISA试剂盒的模式及具体的实验条件.一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤*,不经封闭也可得到满意的结果.而在间接法测定中,封闭一般是*的.


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主营产品：ELISA试剂盒,水检测试剂仪器,放免试剂盒,美国药典标准品,中检所标准品,sigma原装试剂,实验室耗材设备,胎牛血清


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