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技术文章

ELISA试剂盒结果出错解决方案终结版

阅读:86发布时间:2017-7-17

我司ELISA试剂盒技术人员跟大家共享了师兄、师姐们对于ELISA试验中内源性物质搅扰的处理方案。看完的童鞋们,都学起来了没?今天,外源性物质搅扰的处理方案,赶紧学起来!
外源性物质搅扰处理方案汇总:
外源性物质常常是因为用于ELISA测定的血标本的收集、储存等不当所构成的。如标本溶血、标本被细菌污染、标本储存过久、标本凝聚不全和*中增加物等影响。
(1)标本溶血  因为各种人为要素引起的标本溶血,均可因红细胞损坏溶解时释放出很多具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为符号的 ELISA 测定中,会致使非特异性显色,搅扰测定成果。为战胜上述搅扰效果,标本收集时有必要留意防止溶血。
(2)标本受细菌污染  因菌体中可能富含内源性辣根过氧化物酶,因而,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可发生非特异性显色而搅扰测定成果。
(3)标本保留不当  ELISA试剂盒在冰箱中保留过久的标本,血清中 IgG 可聚组成多聚体、AFP 可构成二聚体,在间接法 ELISA 测定中会致使本底过深、甚至构成假阳性;标本放置时刻过长(如一天以上),有时抗原或抗体免疫活性削弱,亦可呈现假阴性。为战胜上述搅扰,ELISA 测定的血清标本宜为新鲜收集;如不能立即测定,5 天内测定的血清标本可存放于 4℃,1 周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充沛混合后再测定,但混匀时应轻柔,不行激烈振荡。
(4)标本凝聚不全  在没有促凝剂和抗凝剂存在的状况下,正常血液收集后 1/2~2 h 开端凝结,18~24 h *凝结。临床查验工作中,有时为了争取时刻迅速检查,常在血液还未开端凝结时即强行离心别离血清,此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原,在 ELISA 测定过程中能够构成肉眼可见的纤维蛋白块,易构成假阳性成果;这类状况于次日复查时因血凝已*,血清中不再有纤维蛋白原存在,故复查成果变为阴性。为防止上述搅扰效果,处理的方法是血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清,或标本收集时用带别离胶的*或于*中加入恰当的促凝剂。
(5)ELISA试剂盒标本管中增加物质的影响  抗凝剂(如肝素,EDTA)、酶抑制剂(如 NaN3 可抑制 ELISA 体系中辣根过氧化物酶活性)及迅速别离血清的别离胶等均对 ELISA 测定有必定搅扰效果。 综上所述,对查验 ELISA 测定中呈现的假阳性或假阴性成果,在思考试剂要素和操作要素以外,更多的应从标本要素方面进行剖析,并应采纳相应措施扫除 搅扰效果,从而为临床提供准确牢靠的检查成果。


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