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植物安排样本的先前处理

阅读:246发布时间:2017-4-5

                     植物安排样本的先前处理                   

1、匀浆介质

通常选用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定目标的状况自行设定浓度,意图是坚持样本的等渗环境。
2、安排匀浆的制备
(1)、取安排块(0.2g~0.5g)起码可到5~10mg在严寒的PBS中漂洗,滤纸拭干,称重,放入5ml的匀浆管中。
(2)、按分量(g):体积(ml)=1:4的比例参加4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪赶快剪碎安排块。
(3)、匀浆的方法:手艺匀浆,机器匀浆。
① 手艺匀浆:左手持匀浆管将下端刺进盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆笔直刺进套管中,上下滚动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成20%的匀浆液。
② 机器匀浆:用安排捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成20%安排匀浆,也可用内切式安排匀浆机制备(匀浆时刻10秒/次,间隙30秒,接连3~5次,在冰水中进行,可适当延伸匀浆时刻),
镜检调查:取少数安排匀浆作涂片(直接涂片、染色均能够),显微镜下调查细胞是不是破碎,若没有则可延伸匀浆时刻。
(4)、将制备好的20%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.
3、样本保留:
 植物安排样本暂时不测定,可当即低温冻存,温度越低越好,中心如不重复冻融,-20℃以下可保留三个月,-70℃以下可保留六个月。
 制备好的匀浆液主张不要冻存,当天进行测定,如放置时刻过长有关酶活会有所降低,部分目标4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,总蛋白测定可存5~7天等)


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