ELSIA试剂盒操作过程：
①抗原包被：兔抗人IgG 作为抗原，用包被液l：8000稀释，十0μL/孔加入聚苯乙烯96孔反响板中。4℃放置。
②洗刷：次日倾去凹孔内的液体，洗刷液洗3次。
③关闭：加l00μL/孔关闭液，室温放置0.5h.
④洗刷：用洗刷液洗3次。
⑤加待测样品(一抗)：将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS 连续稀释(依照1：2或1：十)，十0μL /孔加到 已包被的板上，每个样品平行做两份，PBS 或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育 1~2h。
⑥洗刷：用洗刷液洗3次。
⑦加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用关闭液l ：8000稀释，十0μL／孔，加盖37℃恒温箱温育1h。
⑧洗刷：用洗刷液洗5次，蒸馏水洗2次。
⑨显色：加新鲜制造的底物溶液十0μL/孔，室温暗处放置5～30min，显示蓝色。
⑩停止反响、比色：加50μL/孔停止液。ELISA试剂盒色彩变黄；用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值，阳性反响的zui大稀释度为待测
样品的效价。
一、ELISA试剂盒试验意图
1、深化了解ELISA法测定抗体效价的原理。
2、把握ELISA法测定单克隆抗体效价的办法。
二、试验原理
ELISA是以免疫学反响为根底，将抗原、抗体的特异性反响与酶对底物的催化作用相起来的一种敏感性很高的试验技能。免疫酶技能是将酶标记在抗体/抗原分子上，构成酶标抗体/酶标抗原，称为酶物。该酶物的酶在免疫反 应后，作用于底物使之呈色，根据色彩的有无和深浅，定位或定量抗原/抗体。ELISA 法是免疫酶技能的一种，其特点是使用聚苯乙烯微量反响板(或球)吸附抗原/抗体，使之固相化，免疫反响和酶促反响都在其间进行。在每次反响后都要重复洗 涤，这既确保了反响的定量，也避免了末反响的游离抗体/抗原的分离过程。ELISA试剂盒在ELISA 法中。酶促反响只进行一次，而 抗原、抗体的免疫反响可进行一次或数次，即可用二抗(抗抗体)、三抗再次进行免疫反响。
现在常用的几种ELISA办法有：测定抗体的直接法，测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本试验选用直接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为：首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反响板的凹孔内，加待测抗体，保温后洗刷以除掉未的杂蛋白质，加酶标抗抗体，保温后洗刷，加底物保温30分钟后，加酸或碱停止酶促反响，用目测或光电
比色测定抗体含量。
