因而，这类ELISA试剂盒规格，如N<0.05<>（或别的数值），则按0.05核算，不然将呈现假阳性成果。此本底的深浅因试剂的构成和试验的条件不一样而异，因而试验中有必要加测阴性对照。每批测验均须用一系列不一样浓度的参考规范品在一样的条件下制造规范曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA试剂盒，规范曲线的规模通常较宽，曲线zui高点的吸光度可接近2.0，制作时常用半对数纸，以检查物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线通常呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，*较呈直线的部分是的检查区域。
ELISA试剂盒测定小分子量物质常用竞争法，其规范曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。规范曲线的形状因。在试验条件（包含试剂）较难确保稳定的情况下，这种判别法较为适宜。在得出标本（ S）和阴性对照（N）的A值后，核算S/N值。也有写作P/N的，这儿的P不代表阳性(positive)，而是患者（pati ent）的缩写，不应误解。ELISA试剂盒为防止混杂，更宜用S/N表明。在早期的间接法ELISA中，有些作者定出S/N为阳性规范，现多为各种测定所沿袭。
实际上每一测ELISA试剂盒定体系应该用试验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反响后发生的本底也许较正常人血清的本底低得多。ELISA试剂盒阴性对照的构成应为不含受检物的正常血清或类似物。在用肉眼判别成果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的目标。
