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剖析影响ELISA试剂盒实验非特异性显色剖析

阅读:109发布时间:2017-1-19

聚苯乙烯ELISA板由于ELISA试剂盒质料的不相同和制造技能的不同,各商品的质量差异很大。溶血标本,红细胞溶解决裂,开释出血红素构成,而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本也许会增加非特异性显色。因而,在挑选ELISA试剂盒同时要对其运用的微孔板类型进行认证,评价。试剂盒特异性要素固相载体的挑选,ELISA中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种,以微量滴定板zui为多见。外源性搅扰物,经常因样品收集、贮存、处理不妥形成如样品溶血,被细菌污染,标本凝聚不全等。如在冰箱中保留过久,其间的IgG可发作聚合,在直接法ELISA中可使本底加深。但由于受方法学及技能条件的约束,在酶联吸附测定中有时不可避免的会泛起必定的非特异性,但咱们能够经过以上办法把非特异性显色降至zui低限底,然后前进检查的特异性,并得到更准确、牢靠的试验成果。酶联免疫吸附试验(ELISA)自1971年自面世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简洁、安全,而广泛应用于确诊,创始了免疫学确诊。 
综上所述,由于ELISA试剂盒酶联免疫吸附技能现在在技能上缺少标准化,虽然现在上以及我国有了部分标准血清或参比血清(血清盘)。因而,血标本在收集处理时应当心,在冰箱中保留不易过久。在酶联免疫测定尤其是直接ELISA中,试剂的特异性取决于运用抗原的纯度。ELISA试剂盒标本凝聚不全时,血清中会残留部分纤维蛋白原,也易形成假阳性。检修标本中富含酶符号物的搅扰物,内源性搅扰物类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的本身抗体,多数为IgM类,能充任抗原成分与固相及酶标抗体反响,然后出现非特异性显色。如有细菌污染,菌体中也许富含内源性HRP(辣根过氧化酶),有国内报导酶免HBsAg试剂检查溶血标本时可形成假阳性。影响ELISA中非特异性显色的因素良多,如ELISA试剂盒特异性、检修标本中含酶符号物的搅扰物,操作过程中的标题。黄疸血标本中常富含内源性过氧化物酶,如用辣根过氧化物酶为符号物,就有也许发生非特异性显色。 
现在由于ELISA试剂盒技能条件的约束,包被用抗原或抗体的纯度不也许到达100%,所以有些非特异性显色不可避免,只能尽也许前进纯度,前进特异性。它具有良好的吸附机能,孔底透明度高,空缺值低,各板之间、统一板各孔之间机能相近。ELISA试剂盒但同其它免疫确诊方法相同酶免试剂在它的研讨、出产及运用中经常会遇到非特异性标题,这篇文章就在试验过程中发生的一些因素及怎么采纳一些办法,消除非特异性显色作一剖析。这篇文章就这一因素作一简明剖析,以便能够经过以上办法把非特异显色降至zui低极限,然后前进检查的特异性,并得到更准确、牢靠的试验成果。


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