ELISA试剂盒实验在用肉眼判别成果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的目标。
也有写作P/N的，这里的P不代表阳性（positive），而是患者（patient）的缩写，不该误解。
为避免混杂，更宜用S/N表示。在前期的间接法ELISA中，有些作者定出S/N为阳性标准，现多为各种测定所沿用。
目视法简捷明晰，但颇具主观性。ELISA试剂盒在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这么能够得到客观的数据。
先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴对照（N）的吸光值，然后进行核算。
核算方法有多种，大致可分为阳性断定值法和标本与阴性对照比值法两类。
在实验条件（包含试剂）较难确保稳定的情况下，这种判别法较为适宜。
在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，核算S/N值。
实际上每一测定体系应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应留意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。
ELISA试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。
每次实验设2个阳性对照和3个阴性对照。
有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反响后发生的本底可能较正常人血清的本底低得多。
阳性断定值按下式核算：阳性断定值=NCX+0.05，标本A＞阳性断定值的为阳性，小于阳性断定值的为阴性。
应留意的是，式中0.05为该试剂盒的常数，只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。
因而，这类试剂盒规，如N<0.05（或别的数值），则按0.05核算，否则将出现假阳性成果。
因而实验中有必要加测阴性对照。
阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物。
请求实验条件非常稳定，试剂的制备有必要标准化，阳性和阴性的对照品应契合必定的标准，须配用精细的仪器，并严厉按规则操作。
阳性断定值公式中的常数是在这特定的体系中经过对很多标本的实验检查而得到的。现举某种检查HBsAg的试剂盒为例。
测得A值后，先核算阴性对照A值的平均数（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）有必要大于一个特定的数值（例0.400），实验才有用。
ELISA试剂盒实验3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此规模，则弃去，而已另两个阴性对照从头核算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上围，ELISA试剂盒则该次实验无效。
